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Jena Bioscience/8-(6-Aminohexyl)-amino-cAMP - MANT/NU-851-MNT/200 μl (1 mM)
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Jena Bioscience/8-(6-Aminohexyl)-amino-cAMP - MANT/NU-851-MNT/200 μl (1 mM)
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jenabioscience
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NU-851-MNT
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通过超滤去除DNA扩增产物中的寡核苷酸及过剩dNTP的相关实验步骤、实验技巧、实验protocol、实验经验及常见问题。PCR 反应结束后,从扩增 DNA 产物中去除扩增反应残余下来的寡核苷酸引物,引物二聚体及 dNTP... 查看更多>
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DNA的变性 DNA的复性 核酸分子杂交   变性(denaturation)和复性(renaturation) 是双链核酸分子的二个重要物理特性。也是核酸研究中经常引用的术语。双链DNA,RNA双链区,DNA: RNA杂种双链(hybrid duplex)以及其它异源双链核酸分子(heteroduplex) 都具有 查看更多>
2021-08-05
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第四军医大学西京医院呼吸内科(710032)任新玲 吴昌归 李志奎 李树钧 张 艰 陈卫强 李圣青基础部生物化学与分子生物学教研室付海京免疫学教研室 鲍 炜 杨安钢第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所 钱桂生 HER2 是由 HER2/neu 基因编码的一种酪氨酸蛋白激酶,具有自动磷酸化作用,属表皮生长因子受体(EGFR)家族。乳腺癌、卵巢癌、非小细胞肺癌(NSCLC)等恶性肿瘤存在 查看更多>
B 【解析】E·coliDNA连接酶只能缝合黏性末端,T4DNA连接酶黏性末端与平末端都可以缝合,但对平末端的作用效率较低。练习册系列答案 1... 查看更多>
1 导论 多聚酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)是美国Perkin-Elmer/Cetus公司人类遗传研究室Mullis K. B.等人于1985年发明的一种快速体外DNA片段扩增技术,是八十年代分子生物学资源领域的一项革命性突破,被誉为分子生物学资源发展史上的又一里程碑。该技 查看更多>
磁珠聚核苷酸纯化试剂盒是由北京鸿跃科技有限公司代理或销售的OMEGA品牌的试剂,产品来源于美国。北京鸿跃科技有限公司是中国最权威的磁珠聚核苷酸纯化试剂盒试剂销售服务商之一,在北京等地方销售磁珠聚核苷酸纯化试剂盒试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业磁珠聚核苷酸纯化试剂盒仪器产品及图片,以便挑选到性价比高,合适的磁珠聚核苷酸纯化试剂盒产品 查看更多>
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在近期 Anesthesiology 杂志上,来自美国华盛顿大学圣路易斯分校麻醉学系的 Athiraman 教授等报道了 1 例手术期间用核磁共振成像评估脑实质内温度探针的病例,现介绍如下。基本病史患者,26 周岁男性,因右侧额叶患少突星形细胞瘤、累及至蝶窦,行颅内根治术。在术中核磁共振成像(MRI)显示一线性低信号图像,沿右侧蝶窦延伸至颅内(如图所示)。研究人员分析认为,为一 查看更多>
Basic Method for Direct Immunofluorescence Labeling BackgroundThis is the method for direct immunofluorescence labeling; that is, the antibodies have the fluor 查看更多>
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本人,大学本科生小白,想问一下各位老师,sirna设计出来之后,用snapgene吧sirna与靶mrna进行序列对比为什么没有同源序列,还有如果我想检验sirna是不是脱靶,是不是可以将sirna序列与相关影响的非靶基因序列对比确定哪。

遗传密码 123
jiangu88002021-07-25
我看trna的测序结果,第一个数字的不同会导致trna序列的不同,第二个数字不同序列和二级结构却一样,而且网上的数据库中会给出后两个数字,那这两个数字到底代表了什么含义?
急!tRNA和rRNA到底是如何在翻译中起作用的,有什么作用,如何进行的,翻译时的四叶草形的东西是tRNA吗?请详细一点

国庆节到了,给大家整理下园子内关于siRNA转染的资料。供刚开始进行转染的科研者使用。同时附上自己转染的经验。

第一部分


siRNA理论知识

siRNA转染讨论-蚂蚁淘论坛

细胞转染小技巧-蚂蚁淘论坛

回复:【求助】siRNA观念性问题-蚂蚁淘论坛

回复:【求助】siRNA基因敲除-蚂蚁淘论坛

回复:【求助】shRNA和siRNA的区别-蚂蚁淘论坛

回复:RNAishRNA和siRNA的区别是什么,两者分别用于什么时候?-蚂蚁淘论坛

关于这方面的理论知识去看看文献综述是个好办法。

第二部分

siRNA的设计

siRNA设计的原则-蚂蚁淘论坛

siRNA设计原则-蚂蚁淘论坛

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请问siRNA和shRNA的设计有何区别?-蚂蚁淘论坛

第三部分

siRNA转染效率

FAM-siRNA转染效率检测-蚂蚁淘论坛

荧光显微镜检测细胞转染效率前是否需要换液-蚂蚁淘论坛

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回复:用lipo3000转染结直肠癌细胞dld-1,质粒DNA浓度偏低-蚂蚁淘论坛

关于siRNA转染效率的就推荐这5个帖子吧。有反馈结果的,都基本成功的帖子。外加第5个为质粒转染。

第四部分


siRNA动物体内转染

RNAi及siRNA转染相关实验技术答疑,有问题尽管提-蚂蚁淘论坛

回复:【求助】活体内的RNAi导入实验设计请教-蚂蚁淘论坛


siRNA screen:是指小RNA分子(~21-25核苷酸)扫描,是分子生物学中对RNA研究的一种技术。shRNA在细胞内会自动被加工成为siRNA,从而引发基因沉默或者表达抑制。现在有多个报道说通过质粒表达siRNAs同样可以抑制特定基因的表达。

siRNA:Small interfering RNA (siRNA):是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员,激发与之互补的目标mRNA的沉默。

siRNA有如下特点:
1. 长度约在22nt左右。
2. 依赖Dicer酶的加工,是Dicer的产物,所以具有Dicer产物的特点。
3. 生成需要Argonaute家族蛋白存在。
4. 是RISC组分。
5. siRNA合成是由双链的RNA或RNA前体形成的。
6. siRNA一般是人工体外合成的,通过转染进入人体内,是RNA干涉的中间产物;植物体内也存在内源的siRNA。
7. 结构上, siRNA是双链RNA。
8. 在Dicer酶的加工过程中, siRNA对称地来源于双链RNA的前体的两侧臂。
9. 在作用位置上, siRNA可作用于mRNA的任何部位,并与mRNA完全互补。
10. 在作用方式上, siRNA只能导致靶标基因的降解,即为转录水平后调控。
11. siRNA不参与生物生长,是RNAi的产物,原始作用是抑制转座子活性和病毒感染。
probe英[prəʊb]美[proʊb]
n.[医] (对伤处等的) 针探,探查; [医] 探针,取样器; 探测仪;探头;
vt.探索,调查; 用探针(或探测器等)探查,探测;
vt.盘问; (用试探性袭击等)侦察(敌情) ; 用尖物刺穿(物件); 用力使向前推进;
The more they probed into his background, the more inflamed their suspicions would become
他们越调查他的背景,疑团就越多。
【共享】siRNA对照解析123
白堤8544539862021-08-18
不会,siRNA识别靶序列是有高度特异性的,因为降解首先在相对于siRNA来说的中央位置发生,所以这些中央的碱基位点就显得极为重要,一旦发生错配就会严重抑制RNAi的效应。
tRNA的结构特点:转运RNA分子由一条长70~90个核苷酸并折叠成三叶草形的短链组成的。上图中有两种不同的分子,苯丙氨酸tRNA(4tna)和天冬氨酸tRNA(2tra)。tRNA链的两个末端在图上方指出的L形结构的末端互相接近。氨基酸在箭头示意的位置被连接。在这条链的中央形成了L形臂,如图下方所示,露出了形成反密码子的三个核苷酸。三叶草结构的其余两环被包裹成肘状,在那里它们提供整个分子的结构。四个常见RNA碱基---腺嘌呤,尿嘧啶,鸟嘌呤和胞嘧啶显然不能提供足够的空间以形成一个坚固的结构,因为这些碱基大部分被修饰过以延长它们的结构。有两个奇特的例子,看37号反密码子相邻的碱基,位于甲硫氨酸tRNA(1yfg)或苯丙氨酸tRNA(4tna和6tna)的起始部位。向左转|向右转
tRNA的功能:主要是携带氨基酸进入核糖体,在mRNA指导下合成蛋白质。即以mRNA为模板,将其中具有密码意义的核苷酸顺序翻译成蛋白质中的氨基酸顺序(见蛋白质的生物合成、核糖体)。tRNA与mRNA是通过反密码子与密码子相互作用而发生关系的。在肽链生成过程中,第一个进入核糖体与mRNA起始密码子结合的tRNA叫起始tRNA,其余tRNA参与肽链延伸,称为延伸tRNA,按照mRNA上密码的排列,携带特定氨基酸的tRNA依次进入核糖体。形成肽链后,tRNA即从核糖体释放出来。整个过程叫做tRNA循环(图3)。tRNA靠反密码子与mRNA识别,但并非一种反密码子只能识别一种密码子。例如反密码子CIG(I是次黄嘌呤核苷酸)能识别三种密码子。一般反密码子中的稀有核苷酸因配对不严格而能识别多种密码子,这种现象在生物学中称为“摆动性”tRNA是通过分子中3′端的CCA携带氨基酸的。氨基酸连接在腺苷酸的2′或3′OH基上,携带了氨基酸的tRNA叫氨酰tRNA,例如,携带甘氨酸的tRNA叫甘氨酰tRNA。氨基酸与tRNA的结合由氨酰tRNA合成酶催化,分二步进行:①氨基酸+ATP→氨酰-AMP+焦磷酸;②氨酰-AMP+tRNA→氨酰-tRNA+AMP。与一种氨基酸对应的至少有一种tRNA和一种氨酰-tRNA合成酶(见蛋白质生物合成)。tRNA还具有其他一些特异功能,例如,在没有核糖体或其他核酸分子参与下,携带氨基酸转移至专一的受体分子,以合成细胞膜或细胞壁组分;作为反转录酶引物参与DNA合成;作为某些酶的抑制剂等。有的氨酰-tRNA还能调节氨基酸的生物合成。在许多植物病毒RNA分子中发现有类似于tRNA的三叶草结构,有的也能接受氨基酸,其功能不详。向左转|向右转
一:结构特点:①含有稀有碱基较多,达核苷酸总量的5%-20%。②不同的tRNA尽管核苷酸组分和排列顺序各异,但其3’端都含有CCA序列,是所有tRNA接受氨基酸的特定位置。③所有的tRNA分子都折叠成紧密的三叶草二级结构和L型立体构象,结构较稳定,半衰期均在24小时以上。
  二:主要功能:①运输功能②在逆转录作用中作为合成互补链DNA链的引物。③在细菌细胞壁、叶绿素、脂多糖和氨酰磷脂酰甘油的合成中都与某些tRNA的参与有关。

PNA是一种人工合成的核酸的类似物,与核酸相似,它也是由携带ATGC四种碱基的四种单体首尾相连所构成的链状结构,从而保证这种物质能够像核酸一样靠碱基堆积力形成Watson-Crick碱基对,与DNA、RNA形成杂交分子PNA/DNA或PNA/RNA这就是PNA作为杂交探针的理论基础。所不同的是构成PNA骨架的单体不是通常的带负电的磷酸核糖而是N-(2-氨已基)-甘氨酸,单体之间靠酰胺键连接成长链。这种电中性的骨架结构赋予肽核酸探针优良的杂交特性。

首先PNA/DNA杂交分子的性质很稳定,从化学动力学角度看,PNA/DNA的结合常数有明显提高,一旦形成了双链,即使加入上百倍的寡核苷酸也不能使它解离。据报道,对于含有高度反向重复序列的超螺旋DNA,PNA/DNA杂交分子比DNA/DNA双链的结合常数提高了五万倍;从热力学角度看,PNA/DNA杂交分子的Tm也高于相同序列的DNA/DNA双链,通常,在100mmol/L的NaCl溶液中,PNA/DNA杂合子与相应的DNA/DNA双链相比,每个碱基对的Tm值要高出1℃。也就是说,15个碱基对的PNA/DNA平均Tm值约为70℃,比同样的DNA/DNA要高出15℃。从而使检测过程中的灵敏度大为提高。此外,中性骨架还使PNA与DNA的杂交摆脱了对杂交液盐度的依赖,这一重要性质不仅意味着杂交过程中省去了提高盐浓度的操作,更有意义的是,只要保证杂交体系足够低的离子强度,就能抑制非特异性的杂交和靶DNA序列的自身复性对灵敏度的损害。

不但如此,这种高度的灵敏度并没有像其他种类的探针一样引起特异性的下降,相反它对于碱基错配的容纳力更小。在16bp的PNA/DNA杂合子中,一个碱基的错配会导致Tm值下降15℃,而对于同样的DNA双链,Tm值只下降11℃

原文地址:http://tahepna.com/file_news_read.asp?id=59&class=%D1%D0%BE%BF%BD%F8%D5%B9&fo=4&flag=

你好,很高兴回答你的问题。
探针就是DNA弹针。用于检测特定的DNA片段。
基因探针,即核酸探针,是一段带有检测标记,且顺序已知的,与目的基因互补的核酸序列(DNA或RNA)。基因探针通过分子杂交与目的基因结合,产生杂交信号,能从浩翰的基因组中把目的基因显示出来。根据杂交原理,作为探针的核酸序列至少必须具备以下两个条件:①应是单链,若为双链,必须先行变性处理。②应带有容易被检测的标记。它可以包括整个基因,也可以仅仅是基因的一部分;可以是DNA本身,也可以是由之转录而来的RNA。
进行分子突变需要大量的探针拷贝,后者一般是通过分子克隆(molecular cloning)获得的。克隆是指用无性繁殖方法获得同一个体、细胞或分子的大量复制品。当制备基因组DNA探针进,应先制备基因组文库,即把基因组DNA打断,或用限制性酶作不完全水解,得到许多大小不等的随机片段,将这些片段体外重组到运载体(噬菌体、质粒等)中去,再将后者转染适当的宿主细胞如大肠肝菌,这时在固体培养基上可以得到许多携带有不同DNA片段的克隆噬菌斑,通过原位杂交,从中可筛出含有目的基因片段的克隆,然后通过细胞扩增,制备出大量的探针。
为了制备cDNA 探针,首先需分离纯化相应mRNA,这从含有大量mRNA的组织、细胞中比较容易做到,如从造血细胞中制备α或β珠蛋白mRNA。有了mRNA作模板后,在逆转录酶的作用下,就可以合成与之互补的DNA(即cDNA),cDNA与待测基因的编码区有完全相同的碱基顺序,但内含子已在加工过程中切除。
寡核苷酸探针是人工合成的,与已知基因DNA互补的,长度可从十几到几十个核苷酸的片段。如仅知蛋白质的氨基酸顺序量,也可以按氨基酸的密码推导出核苷酸序列,并用化学方法合成。
RNAi在哺乳动物细胞中通常用于阻断特定基因的表达从而研究基因的功能。成功的进行RNAi
的问题在于使siRNA导入细胞,
将sirna导入细胞内常见的方法是
将靶向特定基因的大约21碱基长短的双链 siRNAs small interfering RNAs。
或者是45 50 mer的发夹结构 RNA 转染到细胞。
此外通过质粒表达siRNAs 同样可以抑制特定基因的表达。