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美天旎
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Granulocyte-macrophage colony–stimulating factor (GM-CSF) is a hematopoietic growth factor, which is essential for proliferation and development of granulocyte and monocyte/macrophage progenitors.
MACS GMP Recombinant Human GM-CSF is designed for
ex vivo
cell culture processing. No animal- or human-derived materials were used for the manufacture of this product, unless otherwise stated in the respective Certificate of Origin. The product is lyophilized without carrier protein or preservatives.

Disclaimer

MACS GMP Products are for research use and
ex vivo
cell culture processing only, and are not intended for human
in vivo
applications. For regulatory status in the USA, please contact your local representative.
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第四军医大学西京医院呼吸内科(710032)任新玲 吴昌归 李志奎 李树钧 张 艰 陈卫强 李圣青基础部生物化学与分子生物学教研室付海京免疫学教研室 鲍 炜 杨安钢第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所 钱桂生 HER2 是由 HER2/neu 基因编码的一种酪氨酸蛋白激酶,具有自动磷酸化作用,属表皮生长因子受体(EGFR)家族。乳腺癌、卵巢癌、非小细胞肺癌(NSCLC)等恶性肿瘤存在 查看更多>
In Situ Cell Death (Apoptosis) Detection by TUNEL labelingby Boehringer Mannheim (Catalog No. 1684809), modified by Josiah N. Wilcox andJosé C. Rodriguez - Emo 查看更多>
p53 is a transcription factor who"s activity is regulated by phosphorylation. The function is p53 is to keep the cell from progressing through the cell cycle i 查看更多>
合成的寡核苷酸在合成时其5端缺少一个磷酸基, 因而极易用T4噬菌体多核苷酸化反应,这种探针可达到于γ=32P从[γ=32P]ATP本身同样高的放射比活度。下面所述的反应是为对10pmol寡核苷酸进行高比活度的标记而设计的。通过扩大或缩小这一反应的规 查看更多>
提供商:上海天贺生物科技有限公司 查看更多>
通过超滤去除DNA扩增产物中的寡核苷酸及过剩dNTP的相关实验步骤、实验技巧、实验protocol、实验经验及常见问题。PCR 反应结束后,从扩增 DNA 产物中去除扩增反应残余下来的寡核苷酸引物,引物二聚体及 dNTP... 查看更多>
上海康朗生物科技有限公司在发布的外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶1(ENPP1)重组蛋白供应信息,浏览与外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶1(ENPP1)重组蛋白相关的产品或在搜索更多与外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶1(ENPP1)重组蛋白相关的内容。 查看更多>
(一) 实验流程(1和2为并列步骤) 1.慢病毒过表达质粒载体的构建 设计上下游特异性扩增引物,同时引入酶切位点,PCR(采用高保真KOD酶,3K内突变率为0%)从模板中(CDNA质粒或者文库)调取目的基因CDS区(coding sequence)连入T载体。将CDS区从T载体上切下,装入慢病毒过表达质粒载体。 2.慢病毒干扰质粒载体的构建 合成siRNA对应的DNA颈环结构,退火后连入慢病毒干扰质粒载体 3 查看更多>
核酸杂交技术是根据两条互补的核苷酸单链可以杂交结合成双链的原理所建立,用一段已知序列的放射性或非放射性标记的核苷酸单链做探针,与待检标本中的DNA杂交来探查待检标本中有无与之相互补的核酸。该方法特异性高,但敏感性低于PCR方法。  本实验学习用非放射性标记物-地高辛(DIG)标记DNA片 查看更多>
Detection of Apoptosis in Paraffin-embedded tissues by ISEL (In Situ End Labeling)The ISEL technique identifies morphologically apparent karyorrhetic cells and 查看更多>
B 【解析】E·coliDNA连接酶只能缝合黏性末端,T4DNA连接酶黏性末端与平末端都可以缝合,但对平末端的作用效率较低。练习册系列答案 1... 查看更多>
Purification of Plasmid from 50 ml-culture1. Shake E. coli harboring plasmid at 37 C overnight in 50 ml of TB containing appropriate antibiotics. (when using a 查看更多>
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【求助】siRNA转染讨论123
心碎在黄昏3822017-11-04
三到五小时。
siRNA (Small interfering RNA),是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员,激发与之互补的目标mRNA的沉默。
rRNA(核糖体RNA)是核糖体的组成成分,它和蛋白质共同组成了核糖体。
tRNA(转运RNA)可以转运氨基酸。
mRNA(信使RNA)是由细胞核内的DNA转录来的,相当于蛋白质的设计图纸。

翻译的过程:核糖体附着在mRNA上,然后tRNA搬运氨基酸,运往到核糖体上,从而拼合成蛋白质。

国庆节到了,给大家整理下园子内关于siRNA转染的资料。供刚开始进行转染的科研者使用。同时附上自己转染的经验。

第一部分


siRNA理论知识

siRNA转染讨论-蚂蚁淘论坛

细胞转染小技巧-蚂蚁淘论坛

回复:【求助】siRNA观念性问题-蚂蚁淘论坛

回复:【求助】siRNA基因敲除-蚂蚁淘论坛

回复:【求助】shRNA和siRNA的区别-蚂蚁淘论坛

回复:RNAishRNA和siRNA的区别是什么,两者分别用于什么时候?-蚂蚁淘论坛

关于这方面的理论知识去看看文献综述是个好办法。

第二部分

siRNA的设计

siRNA设计的原则-蚂蚁淘论坛

siRNA设计原则-蚂蚁淘论坛

回复:【共享】SiRNA序列的设计方法-蚂蚁淘论坛

请问siRNA和shRNA的设计有何区别?-蚂蚁淘论坛

第三部分

siRNA转染效率

FAM-siRNA转染效率检测-蚂蚁淘论坛

荧光显微镜检测细胞转染效率前是否需要换液-蚂蚁淘论坛

回复:siRNA效率-蚂蚁淘论坛

回复:【求助】为何siRNA转染效果不佳-蚂蚁淘论坛

回复:用lipo3000转染结直肠癌细胞dld-1,质粒DNA浓度偏低-蚂蚁淘论坛

关于siRNA转染效率的就推荐这5个帖子吧。有反馈结果的,都基本成功的帖子。外加第5个为质粒转染。

第四部分


siRNA动物体内转染

RNAi及siRNA转染相关实验技术答疑,有问题尽管提-蚂蚁淘论坛

回复:【求助】活体内的RNAi导入实验设计请教-蚂蚁淘论坛


遗传密码 123
jiangu88002021-07-25
我看trna的测序结果,第一个数字的不同会导致trna序列的不同,第二个数字不同序列和二级结构却一样,而且网上的数据库中会给出后两个数字,那这两个数字到底代表了什么含义?
当探针压缩到最大行程的2/3时就达到它的工作行程,此时弹力就和它型号中所标明的弹力相同的。具体可以看一下京伟科技官网上面有详细介绍!

我想要定量血浆miRNA,目前用的方法就是Qiagen公司的血浆提取、逆转、SYBGreenPCR试剂盒引物也是qiagen,目前做出来的结果不是很理想,公司不提供引物序列,只有miRbase上的参考序列,想要证明引物序列、扩增产物是否是我们想要的,有人推荐设计Tapman探针,再做PCR,对比SYBGreenPCR结果,从而来看引物特异性。我的问题是:这样对比有意义吗?我问过很多公司做tapman只合成不设计,要自己提供序列,可我只有数据库中的参考序列,如果我自己有序列了不就可以合成特异引物,为啥要用tapman探针来验证呢?求专业人士答疑解惑!谢谢

这方面的新手还在看文献看帖学习阶段有个疑惑看到有的文章siRNA也会用到载体比如说pSUPERxx

Thecellsweretransientlytransfectedwith4mg(1:1)pSUPER.retroandpSilencer2.1-U6hygrovectors(vectorgroup),4mgHIF-1asiRNA-expressingplasmid(HIF-1asiRNAgroup),4mgVEGFsiRNA-expressing
plasmid(VEGFsiRNAgroup),or4mg(1:1)HIF-1asiRNA-andVEGFsiRNA-expressingplasmids(co-transfectiongroup)bytheLipofectamine2000(LF2K;Invitrogen,Carlsbad,CA)methodaccordingtothemanufacturer’sinstructions

但是我看各位前辈的说法
siRNA是化学合成的加发卡结构后shRNA才可以加载体构建质粒?然后可能在进一步构建病毒

为什么文章把siRNA插入到载体里面呢?我没理解错吧?它这种表述是不是有问题呢?
然后是构建了质粒载体之后可以再包装成病毒吗?那质粒载体可以直接用吗?

可能我表述的也不太清楚。。。希望有前辈简单回答!

RNA的二级结构是发卡型的单链结构,单链回折形成局部小双螺旋。也称茎环结构或球环结构。

tRNA的二级结构:单链内某些区域靠氢键配对形成局部双链,并折叠形成其二级结构-三叶草型结构
三级结构是在二级结构基础上进一步折叠形成,呈“倒L”型。
你好,很高兴回答你的问题。
探针就是DNA弹针。用于检测特定的DNA片段。
基因探针,即核酸探针,是一段带有检测标记,且顺序已知的,与目的基因互补的核酸序列(DNA或RNA)。基因探针通过分子杂交与目的基因结合,产生杂交信号,能从浩翰的基因组中把目的基因显示出来。根据杂交原理,作为探针的核酸序列至少必须具备以下两个条件:①应是单链,若为双链,必须先行变性处理。②应带有容易被检测的标记。它可以包括整个基因,也可以仅仅是基因的一部分;可以是DNA本身,也可以是由之转录而来的RNA。
进行分子突变需要大量的探针拷贝,后者一般是通过分子克隆(molecular cloning)获得的。克隆是指用无性繁殖方法获得同一个体、细胞或分子的大量复制品。当制备基因组DNA探针进,应先制备基因组文库,即把基因组DNA打断,或用限制性酶作不完全水解,得到许多大小不等的随机片段,将这些片段体外重组到运载体(噬菌体、质粒等)中去,再将后者转染适当的宿主细胞如大肠肝菌,这时在固体培养基上可以得到许多携带有不同DNA片段的克隆噬菌斑,通过原位杂交,从中可筛出含有目的基因片段的克隆,然后通过细胞扩增,制备出大量的探针。
为了制备cDNA 探针,首先需分离纯化相应mRNA,这从含有大量mRNA的组织、细胞中比较容易做到,如从造血细胞中制备α或β珠蛋白mRNA。有了mRNA作模板后,在逆转录酶的作用下,就可以合成与之互补的DNA(即cDNA),cDNA与待测基因的编码区有完全相同的碱基顺序,但内含子已在加工过程中切除。
寡核苷酸探针是人工合成的,与已知基因DNA互补的,长度可从十几到几十个核苷酸的片段。如仅知蛋白质的氨基酸顺序量,也可以按氨基酸的密码推导出核苷酸序列,并用化学方法合成。
cpi探针与牙周探针的区别123
dingxiang1212122021-07-30
相关疾病:牙周炎牙周炎轻度牙周袋小于4mm中度小于6mm重度大于6mm但是牙周探针刻度在3.5mm5.5mm处...

有问题要请教实验前辈!

用SiRNA抑制蛋白A的表达,SiRNA转染48小时后可观察到蛋白A表达明显下降.

现在想检测SiRNA抑制A蛋白表达后对凋亡蛋白、迁移蛋白及周期蛋白的影响,应该在SiRNA干扰后多长时间检测这些蛋白的变化?48小时?72小时?96小时?

望高手解答,我的理解是转染48小时后A蛋白表达下降,如果要观察A蛋白对以上蛋白的影响,应该在转染后超过48小时再检测这些蛋白的变化,比如72小时或96小时,不知道我的理解对不对?

先谢了!

求助:
编码线虫的氨基酰tRNA合成酶是否和编码大鼠的氨基酰tRNA合成酶的基因相同?
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