一、实验目的与原理质粒多为一些双链、环状的DNA分子，是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作，进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。提取质粒的基本步骤分为三步：①细菌的培养和质粒的扩增，②细菌菌体的裂解，③质粒DNA的纯化。本实验采取的菌体裂解方法为碱解法，质粒纯化方法为梯度离心法。二、材料与试剂1、材料：大肠杆菌2、仪器：超净工作台，培养箱，摇床，恒温水浴锅，台式离心机，取液器一套，低温冰箱，冷冻真空干燥机，电泳仪，水平电泳槽，紫外观测仪3、试剂：SolutionI25mMTris-Hcl(pH7.4)10mMEDTA(pH8.0)50mM葡萄糖高压灭菌，4℃保存SolutionII0.2MNaOH,1%SDS现配现用SolutionIII5NKAcpH4.8高压灭菌，4℃保存3MNaAcPH5.2,高压灭菌，4℃保存。异丙醇，溶菌酶（8mg/ml），酚/氯仿，无水乙醇，70％乙醇，LB培养基，电泳试剂三、操作步骤1、细菌繁殖LB培养基，2ml/20ml，37℃，200rpm，摇一摇，过夜2、离心10min，5000rpm,4℃；弃上淸液3、沉淀（菌体细胞）预冷的TES缓冲液洗涤，离心10min，5000rpm,4℃加入预冷的1mlSolutionI，冰浴，10min4、重新悬浮，加入150ul溶菌酶母液，室温放置5min5、加入1.2mlSolutionII,冰浴，5min6、加入0.9ml预冷乙酸钾，混匀，离心10min，12000rpm,4℃7、加入1.5ml异丙醇，-20℃冰箱内放置15min8、离心10min，12000rpm,4℃9、取沉淀，悬于400ulTE缓冲液中10、加入40ul，3MNaAc11、酚/氯仿，抽提，乙醇沉淀12、离心10min，12000rpm,4℃13、取沉淀，冷冻干燥，再悬浮于50ulTE缓冲液中。14、电泳检测提取DNA的质量三、结果与分析超螺旋结构DNA
