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染色体DNA的提取
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一、实验目的与原理DNA是遗传信息的载体,是最重要的生物信息分子,是分子生物学研究的主要对象。DNA的提取是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作。本实验通过植物样品在液氮下研磨以粉碎组织,通过裂解液裂解细胞,有机溶剂反复抽提,使DNA进入水相与蛋白质成分分开,在RNase作用下,降解RNA以纯化DNA。二、材料以方法1、材料:培养菌体2、仪器设备:超净工作台,培养箱摇床,恒温水浴锅,高速冷冻离心机,台式离心机,移液枪一套,低温冰箱,冷冻真空干燥机,电泳仪,水平电泳槽,紫外观测仪3、试剂:细胞裂解液100mMTris-HCl5mMEDTA500mMNaCl1.25%SDSPH7.5饱和酚,氯仿/异戊醇,酚/氯仿/异戊醇无水乙醇,70%乙醇,异丙醇3MNaAcpH5.2,RNase,50×TE缓冲液,电泳载样缓冲液三、操作步骤(1)培养菌体(2)加入10ml裂解液,1/10体积酚,于65℃下20-30min,然后加入等体积的氯仿,轻摇(3)12000-15000rpm离心15min(4)取上淸液,加入等体积氯仿,轻摇,12000-15000rpm离心15min(5)取上淸液,加入0.6倍体积冷异丙醇(-20℃)或2倍体积冷无水乙醇(-20℃)(6)加入1/10体积的3MNaAc(pH5.2),置于室温下10min(7)12000-15000rpm离心10min(8)倒弃液体留下沉淀,用70%乙醇洗涤沉淀(9)加入2倍体积无水乙醇(10)12000-15000rpm离心10min(11)倒弃液体留下沉淀,真空干燥(12)复溶于2mlTE(13)加入RNase,65℃或37℃处理10-30min(14)加等体积酚,酚/氯仿,氯仿各一次,12000-15000rpm离心10min(15)取上淸液,加入0.6倍体积冷异丙醇(-20℃)或2倍体积冷无水乙醇(-20℃)(16)加入1/10体积的3MNaAc(PH5.2),置于室温下10min(17)12000-15000rpm离心10min(18)倒弃液体留下沉淀,用70%乙醇洗涤沉淀(19)真空干燥沉淀(20)复溶于0.5-1.0ml的TE或水中,分装成小体积,4℃或-20℃保存。(21)电泳检测提取DNA的质量四、结果与分析点样空,若发亮则说明有污染超螺旋结构DNA,若条带有拖尾则说明有破碎的DNA少量未清除的RNA五、注意事项1、重点防止DNA的损伤,包括各种物理、化学和机械损伤。2、干燥好的染色体DNA最好溶于去离子水,以备后面直接利用。如果用TE缓冲液溶解,后面还需去离子。3、取上清时,如果上清液过少,可再加入少量水,重新离心,取上清,避免DNA损失过多。

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