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我以前溶解DNA、PCR产物用的一直是fermentas的PCR酶带的一些nuclear-free的水。
现在..用完了..因为接下来的PCR产物会做酶切,测序,而且保存时间也可能比较长(1个月左右吧)。
Qiagen的DNA提取
试剂盒中提到过溶解DNA不可以用酸性的水,会发生水解。但是超
纯水机出来的水确实是酸性的...再高压过估计也不会改变。该怎么制备呢?
1、DNA提取问题:现在核算提取试剂盒大部分都是吸附柱法,相信你应该不会操作错误,如果提取之后进行核酸定量结果很低的话,试着再最后一步溶解核算的时候把水稍微加温(37℃就可以了),溶解时间稍微长一些,然后再离心的时候采用分次离心,比如开始你用200ul溶解的话,你可以分两次用100ul水溶解离心,这样可以提高DNA的产率.
2、电泳问题:如果你核酸定量浓度不低的话就考虑电泳问题,电泳的时候加上1kb的marker,如果marker跑不出来说明你凝胶有问题,一般只要marker跑出来了,DNA浓度又比较高,而没有条带这样的现象很少见,DNA提取比较简单而且相当稳定,本人当时做甲基化提取的DNA有一次拿出来电泳忘了放回冰箱了,结果大夏天的在外面放了一天,心怀忐忑的进行了一次电泳,结果条带依然给力,一点都没有降解.
要看你做什么用途了,血浆中的游离DNA本身就很少的,我用过天根和杭州昊鑫生物这两家的血浆游离DNA提取试剂盒,总的来说,两家的性能,杭州昊鑫生物的纯度和提取量要略好一点,后续检测的PCR结果也好一点,CT值比天根的要早3个循环左右,而且,杭州昊鑫生物的试剂盒提取耗时短,比较适合样本多的用户。
哪位专家可以帮我一下,能不能给我一份详细些的关于构建基因组
文库的基因组DNA的提取流程及注意事项?谢谢大家了!
另外,我准备买clonetech公司的基因组文库构建
试剂盒,大家认为怎么样?有什么好的建议?
室温。低温保存可能会有沉淀析出。如果发生析出现象,请于50℃溶解后,再于室温保存。向左转|向右转
全血基因组DNA提取试剂盒(离心柱型)作用原来具体是这样的:独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱. 试剂盒特点: 不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤. 快速,简捷,单个样品操作一般可在20分钟内完成. 多次柱漂洗确保高纯度,典型的产量200μl全血可提取出3-6μg,纯度达1.1.9,长度可达30Kb-50kb,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应. 从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方,裂解快速完全,客户可根据需要选择购买. 说明书中针对实验过程出现的疑难做出了详细的解答,帮助你解决实验过程中遇到的问题(如标本中含有血凝块、红细胞裂解不完全、DNA产量低、DNA下游酶切不能切开或者酶切不完全、DNA长度小于15kb、A260吸光值异常偏高、洗脱下来的DNA溶液还带有轻微的颜色等).
规格50T售价300,规格100T售价560。以下为试剂盒使用方法及介绍。保存:室温(15℃-25℃) 干燥保存,复检期12个月,2℃-8℃保存时间更长。试剂盒内容: 向左转|向右转产品简介:本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取细菌基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,能够高效专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。操作步骤:使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。 所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。1、取细菌培养液1ml,12000rpm离心1min.,尽量吸除上清。2、向菌体中加入200ul溶液A,振荡或用移液器吹打使菌体充分悬浮(如果是革兰氏阳性菌,可在此步骤加入终浓度为20mg/ml的溶菌酶),向悬浮液中加入20ul的RNase A (10mg/ml),充分颠倒混匀,室温放置15-30min。3、向管中加入20ul的蛋白酶K(10mg/ml),充分混匀,55℃消化30-60min,消化期间可颠倒离心管混匀数次,直至样品消化完全为止,此时可见菌液呈清亮粘稠状。4、向管中加入200ul溶液B,充分颠倒混匀,如出现白色沉淀,可于75℃放置15-30min,沉淀即会消失,不影响后续实验。如果溶液未变清亮,说明样品消化不彻底,可能会导致DNA的提取量以及纯度降低,还可能堵塞吸附柱。5、向管中加入200ul无水乙醇,充分混匀,此时还可能会出现絮状沉淀,不影响DNA的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入到吸附柱中,静置2min。6、12000rpm离心2min.弃废液,将吸附柱放入收集管中。7、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否己加入无水乙醇)。12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。8、向吸附柱中加入600ul漂洗液,12000rpm离心l min, 弃废液,将吸附柱放入收集管中。9、12000rpm离心2min,将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续实验如酶切、PCR等。10、将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50-200ul经65℃水浴预热的洗脱液,室温放置5min,12000rpm离心1min。11、离心所得洗脱液再加入吸附柱中,室温放置2min,12000rpm离心2 min,即可得到高质量的细菌基因组DNA。注意事项:1、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。2、若试剂盒中的溶液出现沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响提取效果。3、如果实验中的离心步骤出现柱子堵塞的情况,可适当延长离心时间。4、洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul,体积过小会影响回收效率;洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围),pH值低于7. 0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。5、DNA浓度及纯度检测:得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。 回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1.0相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。OD260/0D280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。
不是太了解!我建议你用河南惠尔生物的磁珠法土壤DNA提取试剂盒!效果不错!
DNA提取试剂盒是根据氯化芐法构建的,能够从样本中提取基因组DNA的试剂盒。氯化苄具有能将含有纤维素等的细胞壁中的羟基苄基化,从而破坏细胞壁的特性。本制品利用了氯化苄的这一特性,将植物样品冻结融解后,再使用Pipet Tip的尖端将植物样品在Microtube壁上数次按压即可破坏细胞壁。本法与传统方法相比,省去了液氮研磨等烦琐步骤,有利于一次性处理大量样品。而且,本制品经过了改良,热处理时间只需15分钟,使用本制品从实验开始至水相回收只需30分钟时间。得到的基因组DNA可以进行PCR扩增及限制酶处理等。
请教DOP-PCR和ALU-PCR在扩增BAC/PACDNA制备探针
文库时的优劣,或者说都可以。
axygen dna提取试剂盒有证书的,一般代理商都有证书,
这个是用于代理授权的,这个可以说是唯一辨别产品真伪的方法,
有证书的企业,销售的产品可信度比较高。