图1.延长电转时间时0.45umPVDF膜和0.2umPVDF膜结合蛋白的效果。分子量标准品（第1、3、5、7泳道）和小牛肝裂解液（第2、4、6、8泳道）通过槽转印法转移到0.45umPVDF膜和0.2umPVDF膜，并用考马斯亮蓝染色。在第一张转印膜后再放一张0.2umPVDF膜以捕获穿过的蛋白。（第5和6泳道在0.45umPVDF后面；第7和8泳在0.2umPVDF后面。即第三张膜是放在第一和第二张膜的后面)
图2.小牛肝脏蛋白在电转到Immobilon®-P转印膜后的观察：(A)透照，(B)考马斯亮蓝，(C)丽春红，(D)氨基黑和(E)CPTS总蛋白染料。从左到右，每条泳道依次是分子量标准品和12.2g、6.1g、3.1g裂解液。
PVDF膜丽春红染色步骤？
必备的设备和溶液：
(1)染料：0.2%丽春红、1%乙酸。按1:10用1%（v/v）乙酸稀释储液（20%染料，溶于30%（w/v）三氯乙酸和30%（w/v）磺基水杨酸）而制备；
(2)甲醇，100%；
(3)0.1NNaOH；
(4)双蒸水；
(5)能容纳印迹膜的浅托盘。
染色步骤：
(1) 如果印迹膜是干燥的应先在100%甲醇中浸湿;
(2)在托盘中加入足量的染料以覆盖印迹膜;
(3)将印迹膜放入染料中，摇动1分钟;
(4)取出印迹膜，用双蒸水彻底冲洗，直至达到所需的对比度;
(5)若要彻底去除染料，用0.1NNaOH清洗印迹膜。
图3.使用Reblot抗体剥离液快速剥离膜上的抗体
WB曝光后PVDF膜如何保存？
PVDF是一种化学耐受性好的聚合物，有着出色的长期稳定性。对于那些需要保存以供日后使用的印迹而言，保存条件是由与膜结合的蛋白的稳定性决定的。MerckMillipore建议低温保存，室温对一些蛋白来说也是可以的。
必备材料：
(1) 干燥的PVDF转印膜;
(2)两张Whatman®3MM滤纸;
(3)两张卡纸或薄的硬纸板;
(4)回形针;
(5)塑料袋。
染色步骤：
(1)将干燥的印迹膜放在两张干净的Whatman®3MM滤纸中间。
(2)将印迹膜-滤纸三明治放在两张卡纸之间。
(3)用回形针夹住边缘。回形针不要压住印迹膜。
(4)将它们放入可密封的塑料袋中。
(5)关闭或密封塑料袋。
(6)将印迹膜保存在所需的温度：
4°C最多2周；
-20°C最多2个月；
-70°C长期保存。
注意：保存在冰箱冷冻室的印迹膜不能受到机械冲击，这会导致膜破损。印迹膜应恢复到室温后才从塑料袋中取出。印迹膜也可放在塑料袋中置于4°C，但应加入叠氮化钠等杀菌剂，以防止细菌生长。在使用之前必须彻底洗掉叠氮化物，以免抑制HRP的活性。
Immobilon®-E即用型PVDF转印膜
告别高浓度甲醇预润湿，WB操作更安全、更健康
蛋白载量高，免疫信号强，低背景
韧性好，易操作，适于长时间存放
可以用于多次抗体剥离和再杂交
