Phenolbased Method for the Isolation of DNA Fragments from LowMelting Temperature Agarose
来自 : 蚂蚁淘
Phenol-basedMethodfortheIsolationofDNAFragmentsfromLow-MeltingTemperatureAgarose
- Reference:Favre,D.1992.Biotechniquesvol.13
- CutoutslicecontainingDNA,smallestsizepossIBLe.
- EstimatevolumeanddoublewithTE(10mMTris-HCl,pH8.0/1mMEDTA).Meltat65C5-10min.
- Add1volumeTris-bufferedphenolatroomtemperature,mixbyinversion.
- Spin3minat10-12krpmandtransferaqueousphasetonewtube.Phenolextractagain.
- Spinasin(4)andtransferaqueousphasetonewtubecontaining0.1volume4MLiCl.Mixbyinversion;awhiteprecipitateformsimmediately.Placetubeonice2min.Spinasabove,3min.
- Transfertonewtube,leavingtransparentpelletbehind.Add1ulcarrier(glycogen)andprecipitatewith2.5volumescoldethanol.Mix,leaveat-70C5-10min,andspinasabove,10min.Washpelletwith1ml70%ethanol,dryundervacuum,andresUSPendin10-20ulwaterorTE.
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