MaximizedpackagingefficiencyoflamBDa,cosmid,orfosmidDNAfortheconstructionoflargeinsertgenomiclibraries.
- ConstructgenomiclibrariesfrommethylatedorunmethylatedDNAwithequalefficiencyduetothelackofallknownrestrictionactivitiesintheextracts.
- Packagingefficienciesofupto3×109pfu/µgDNA.
- Simplifiedprotocoldoesnotrequirepremixingofdifferentextractcomponentsbeforeuse.
MaxPlax™LambdaPackagingExtractsoffermaximuminvitropackagingefficienciesofcossite-containingmethylatedorunmethylatedDNA.TrADItionallambdapackagingextractsarederivedfromtwocomplementarylysogenicE.colistrains,BHB2690andBHB2688,asdescribedbyHohn.1MaxPlaxExtractsusearestriction-freeE.coliK-12strain,NM759,inplaceofstrainBHB2690.2ThesonicatedextractsofNM759arecombinedwithextractsofBHB2688toproduceMaxPlaxExtracts.
EachlotofMaxPlaxExtractsistestedandguaranteedtomaintainapackagingefficiencyofgreaterthan1×109pfu/µgofControlLigatedLambdaDNAfor1yearfromthedateofpurchaseifstoredproperly.ACertificateofAnalysisstatingactualpackagingefficiency(pfu/µgDNA)isprovidedwitheachlotofMaxPlaxExtracts.
Table1.PackagingofmethylatedandunmethylatedDNAusingMaxPlax™LambdaPackagingExtracts. | |
CosmidInsert | Pfu/µgDNA |
UnmethylatedDNA | 3.5x107 |
MethylatedDNA | 3.9x107 |
References
- Hohn,E.G.(1979)MethodsEnzymol.68,299.
- Gunther,E.G.etal.(1993)NucleicAcidsRes.21,3903.
- Fiandt,M.(2000)EpicentreForum7(3),14.
ORDERINFORMATION
Contents:PredispensedMaxPlax™Extracts,ControlLambdaDNA,ControlHostCells(E.coli).ebiomall.com
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1.如果在引物的5’引物引入了T7启动子,3‘引物也引入了polyT,PCR扩增出全长片段,回收纯化之后可以用来直接做体外转录么?为什么看到文献里都是先把这个PCR片段连接到载体里面,扩增之后提取出来线性化之后,再进行体外转录。是不是转录对模板的量有要求?
2.如果使用一些带有T7启动子序列的载体比如pBluescriptSK,在启动子序列和酶切位点之间还有多余的一段序列,这段序列也会被启动子转录,这一小段多余的序列是否会对接下来的转染以及病毒拯救带来影响?
3.有人在做反向遗传么,哪些载体可以用来进行体外转录?插入片段为7.5K。
2) 克隆技术使用使倾向于量繁殖现种群利用价值体,按自规律促进整种群优胜劣汰.意义说,克隆技术干扰自进化程.
3) 克隆技术种昂贵技术,需要量金钱物专业士参与,失败率非高.莉277实验唯.虽现发展更先进技术,功率能达2-3%.
4) 转基物提高疾病传染风险.例,产药物牛奶牛染病毒,种病毒能通牛奶染病
5) 克隆技术应用于体导致代遗传性状工控制.克隆技术引起争论核能否允许发育初期类胚胎进行遗传操作.伦理家所能接受.
6) 克隆技术用创造超,或拥健壮体格却智力低.且,克隆技术能够类效运用,男性失遗传意义.
7) 克隆技术家庭关系带影响巨.由父亲DNA克隆孩看作父亲双胞胎兄弟,延迟几十已.难设想,发现自另外完全复制品,(或)受
1、RNA干扰基因蛋白的表达的过程是瞬间的还是一步步的,需要一段时间才能使目的基因沉默。
2、关于siRNA的合成,有好多种,但文献报道的一般是化学合成的和通过构建质粒表达载体完成的,但据俺了解,体外转录和RNA酶III酶切从时间上和价格上都比这两种方法好,为何这么多研究者青睐这两种方法呢
3、俺打算用此方法研究某个基因的功能,想先进行体外实验,然后再进行在体实验,请教各位,用哪种方法比较好?
4、如果用质粒的话,究竟用哪种质粒好呢?听说质粒比较昂贵,看到好多文献所用质粒都是惠赠的,怎么才能通过惠赠的方式获得质粒载体呢
或许俺提的这些问题过于低级,恳切希望各位高手予以解答,不才万分感激!
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