1）取10ul待测DNA，于一定浓度的琼脂糖凝胶上进行电泳。(20mL,1.0%凝胶,)2)凝胶用溴化乙锭染色，切掉凝胶四周多余部分，并在凝胶的一角作一记号,拍照记录电泳结果(拍照时,凝胶旁放一尺子)。3)杂交用胶的制备(做以下步骤两组合一)A．将凝胶浸没入30mL0.25mol/LHCl溶液中15min，使DNA脱嘌呤。B．用蒸馏水短暂洗凝胶2次。C．将凝胶浸没入30mL变性液中30min,使凝胶变性。D．将凝胶浸没入30mL中和液中15min使它被中和。重复D一次。在制备杂交用胶时准备转移的平台、膜、滤纸等(4、5)。4)准备DNA从凝胶向膜转移的平台5)将1张待用尼龙膜和3张厚滤纸切成与待转移胶相同大小，并在尼龙膜一角做一标记。另1张厚滤纸切成与凝胶相同宽度，长度(约18cm)足以达到转移液盒子的底部。准备10XSSC转移液。将待用尼龙膜用蒸馏水浸湿后，再浸入10XSSC转移液中。6）安装毛细管转移装置A．将长的滤纸放在转移平台的顶部，滤纸两端达到转移盒的底部，做成虹吸桥。B．将80mL转移液倒入转移盒内，并湿润滤纸。C．将凝胶背面朝上置于滤纸搭成的桥上，凝胶与滤纸间避免有气泡。D．用保鲜纸封住凝胶四边。E．将浸湿的转移膜置于凝胶的上部，凝胶与膜间避免有气泡。F．将剩下的3张滤纸小心的放在转移膜的上面，并放一叠吸水纸搭在滤纸上，再放一玻璃板，其上压一重物。G．转移几小时或过夜(至少4小时)注意：勿使转移液干枯。7)已转移的DNA与膜交联A．将膜放在浸有10XSSC的厚滤纸上，有DNA的一面朝上。B．将膜置于UVcrosslinker中，在紫外光下自动交联。C．用蒸馏水短暂的漂洗已交联的膜，空气中干燥。此膜可在4oC长期保存。8)DNA探针的制备(略过)参照生产商提供的实验方法合成地高辛标记的探针。9）印迹的预杂交将适量的预杂交液DIGEasyHyb在42oC预热。放入印迹膜,在42oC预杂交30min。10)准备探针水煮地高辛标记的探针5min使变性,并立即放在冰上2min.11)加适量的探针到已预热的杂交液中,混合均匀(避免形成泡沫,影响杂交效果)。42oC杂交至少4小时或过夜。注意:不要将探针直接加在印迹膜上，而应加在容器一角的预杂交液中12）印迹膜的冲洗：A．将杂交液倒出，储存起来可再次使用。B．用25mL的2XSSC,0.1%SDS在室温摇动洗膜2次,每次5min.C．用已预热的30mL0.5XSSC,0.1%SDS在65oC摇动洗膜2次,每次15min(用杂交炉).13)免疫检测:A.用10mL冲洗液洗膜1-5min.B.膜在15mL阻断液中孵育30minC.膜和8mL抗体孵育30minD.在15mL冲洗液中洗膜2次,每次15min.E.在15mL检测液中平衡2-5min.14)将膜的有DNA的面朝上,放在保鲜纸上,滴数滴CSPDready-to-use覆盖膜;然后,立即用保鲜纸包裹,挤掉多余的CSPDready-to-use,使其均匀平铺在膜上,没有气泡,但避免使膜干掉.室温孵育5min.15)在37oC孵育潮湿的膜10min,增强发光.16)用X-光底片将杂交膜进行曝光10-25min.(发光性能至少可持续48小时)17)X-光底片的冲洗Agfa30显影液显影(1-5min)---冲水(1min)---F5定影液定影(10min)---用水冲洗---晾干底片