克隆基因全长，求大神指点
2021-07-26
问题描述：
大家好，我最近在克隆一个基因的全长序列，用的是cDS，之前的引物在NCBI上Blast,是特异引物，一开始没有条带，通过不断的试程序，重提RNA等，出现条带了，大小也对，结果测序不是我的基因，然后重新换引物，现在的情况是，51度有我的条带，但是有很多杂带，升高退火温度后，以及减少循环后，啥也没有了，求大神指点。
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dxy_e0h61qqw
用户
升高一度就没条带了，这是为什么
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ULYSSEESWB
用户模板不行另外试试touchdown
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mppvictoria
用户高度怀疑模板，原来我做构建也是PCR了很多次，每次都是位置上有，但是条带很暗，后代才发现是模板问题，换了模板，退火温度大概在60度左右都能P出来。PCR一共就那几种东西，水，酶，dNTP。都是一样的，那原因就只有模板，引物，退火温度。附带问一句，你用的哪个公司的试剂？
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