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求 克隆基因启动子的方法
2021-08-06
问题描述:

我想得到水稻一个基因的启动子序列,只知道基因序列,不知道启动子的序列,想的到启动子序列,各位大侠帮帮忙。先谢谢了。

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天生我才
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有高手帮一下吗? 斑竹 帮忙顶一下,我很焦急.
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westernblot
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方法有两个,一个是用常规的PCR方法来调序列。如果你知道改基因的序列,可以通过查找改基因的上有序列。通常在基因转录起始点的上有,如果你对基因的表达不清楚,先坐RACE来确定5UTR序列,让后上游序列大概200-1000KB是基因启动子,先用软件分析是否有产规的转录因子结合位点,然后可以克隆后分析是否有启动子活性。如果你不知道全序列,用genomicwalking的方法,可以购买试剂合,从已知序列设计下游引物,向上游walking.上游引物是已知的,具体原理是用平端酶切基因组DNA,然后用平端连接引物(已知),连接构成不同大小的DNA模板库,这样两端的引物是知道的,而你的基因序列也是知道的,可以在基因上面设计引物(两个)来扩增。具体方法如果游问题再问。开始前要好好读通说明书,否则很难拿到正确结果的。
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dna2
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水稻的基因组已经全测序,找到该序列,然后分析前面的序列,PCR扩增出启动子就行了。如果不确定,可以扩增基因前面不同长度的序列,然后看看启动基因的功能。
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gallstone
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请问如何查找人的基因组全序?
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