【求助】怎样用液氮罐直接冻存细胞
2021-07-20
问题描述:
技师提供冻存细胞方法为4度2小时,-20度2小时,-70度然后放入液氮。但最近-70冰箱坏了,所以想要液氮罐直接冻存。-20度拿出以后放在液氮液面以上多高处可以?多长时间?才可放入液氮里?
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zhangzizheng
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细胞株的冻存:1. 取培养2~3天生长旺盛的细胞,用细胞培养液将细胞配成2×106~2×107/ml。2. 在1ml细胞冻存管中加入0.5ml细胞悬液,0.4ml小牛血清和0.1ml二甲基亚砜(或甘油),混匀后密封。置4℃ 1小时,-20℃ 2小时,然后直接放入液氮中或置液氮蒸汽上过夜后浸入液氮中。这是我们实验室的做法,你斟酌一下!
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hayaoshengwu
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将细胞冻存管置4 度冰箱中1.5-2小时, 然后直接放置-20 度的冰箱中2—3小时,然后将冻存细胞悬于用于存放工作细胞株的液氮罐口过夜,第2天将冻存管放入液氮中长久保存。
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beyond2008
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-20度拿出后,直接放入液氮罐也可以。我有时就是这么做的,再复苏时细胞状态也很好。当然,慢冻最好了,可以在液氮罐口下面悬一会,我认为无所谓多长时间与高度吧。隔个10来分钟向下放一点,两三次进入液氮就可以了吧。个人意见。-20度放置两个小时。我有时忘了,第二天才放液氮。-20度保存的话,应该能保存1年吧?请教。
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zhangzizheng
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-20度放一年也太长了。我-20度是放1~2小时,然后-80度放12小时,在液氮口放半小时,靠近液面再放半小时,最近投入液氮。效果也很不错!总之原则是要缓冻,具体条件自己摸索了!
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