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流式细胞仪细胞凋亡试验,全是活细胞
2016-11-19
问题描述:

因为研究的是细菌,做了一组细菌的流式细胞仪的凋亡试验,发现99%都是Q4活细胞,第Q1.Q2.Q3象限很少,FITC和PI双染,BD试剂盒,按照说明书PBS洗两次,之后buffer重悬后测的,今天又重新做了一组,这次把菌液调到pH12,并且用超声处理过,但是还是99%活细胞,块崩溃了。。。

看到论坛上也有之前的帖子,但是帖子没说后来是怎么处理的,**各位大神不吝赐教,5555555


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热爱医学的小猪
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怎么证明你第一个图左下角的细胞是细菌?是否有合理的对照说明这一点?细菌比细胞一般小得多,它在FSC-SSC上的位置更靠左下,但是这个位置很可能是碎片的噪声,而非你想检测的细菌,BD的试剂盒子是检测细胞的吗?可能拿来做细菌要摸索一下条件,FITC标记的是什么?
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dxy_bev82n3
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自己顶一下啊
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热爱医学的小猪
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怎么证明你第一个图左下角的细胞是细菌?是否有合理的对照说明这一点?细菌比细胞一般小得多,它在FSC-SSC上的位置更靠左下,但是这个位置很可能是碎片的噪声,而非你想检测的细菌,BD的试剂盒子是检测细胞的吗?可能拿来做细菌要摸索一下条件,FITC标记的是什么?
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dxy_bev82n3
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展开引用热爱医学的小猪怎么证明你第一个图左下角的细胞是细菌?是否有合理的对照说明这一点?细菌比细胞一般小得多,它在FSC-SSC上的位置更靠左下,但是这个位置很可能是碎片的噪声,而非你想检测的细菌,BD的试剂盒子是检测细胞的吗?可能拿来做细菌要摸索一下条件,FITC标记的是什么?......谢谢您的回复,我刚开始做流式细胞,很多地方不懂,这个图是实验室的老师给做出来的,他之前也没有做过细菌,做细胞很多,按照做细胞的经验取的左下角,BD的试剂盒是AnnexinV-FITC/PI双染测细胞凋亡的,如果是碎片,有没有什么办法检测到细菌,条件应该怎么摸索呢?
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热爱医学的小猪
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展开引用dxy_bev82n3热爱医学的小猪怎么证明你第一个图左下角的细胞是细菌?是否有合理的对照说明这一点?细菌比细胞一般小得多,它在FSC-SSC上的位置更靠左下,但是这个位置很可能是碎片的噪声,而非你想检测的细菌,BD的试剂盒子是检测细胞的吗?可能拿来做细菌要摸索一下条件,FITC标记的是什么?谢谢您的回复,我刚开始做流式细胞,很多地方不懂,这个图是实验室的老师给做出来的,他之前也没有做过细菌,做细胞很多,按照做细胞的经验取的左下角,BD的试剂盒是AnnexinV-FITC/PI双染测细胞凋亡的,如果是碎片,有没有什么办法检测到细菌,条件应该怎么摸索呢?......我觉得首先要证明你收到的信号确实是来自于细菌的,可以跟流式的老师交流下,一般细菌小,所以需要的阈值低一些,不过检测细菌是没问题的,可以以纯水为对照,两管比较一下就知道了,多思考多看书
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dxy_bev82n3
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展开引用热爱医学的小猪dxy_bev82n3热爱医学的小猪怎么证明你第一个图左下角的细胞是细菌?是否有合理的对照说明这一点?细菌比细胞一般小得多,它在FSC-SSC上的位置更靠左下,但是这个位置很可能是碎片的噪声,而非你想检测的细菌,BD的试剂盒子是检测细胞的吗?可能拿来做细菌要摸索一下条件,FITC标记的是什么?谢谢您的回复,我刚开始做流式细胞,很多地方不懂,这个图是实验室的老师给做出来的,他之前也没有做过细菌,做细胞很多,按照做细胞的经验取的左下角,BD的试剂盒是AnnexinV-FITC/PI双染测细胞凋亡的,如果是碎片,有没有什么办法检测到细菌,条件应该怎么摸索呢?我觉得首先要证明你收到的信号确实是来自于细菌的,可以跟流式的老师交流下,一般细菌小,所以需要的阈值低一些,不过检测细菌是没问题的,可以以纯水为对照,两管比较一下就知道了,多思考多看书......老师也不太确定信号是不是细菌的,纯水对照我一会跟老师说一下,谢谢您的思路!
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热爱医学的小猪
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展开引用dxy_bev82n3热爱医学的小猪dxy_bev82n3热爱医学的小猪怎么证明你第一个图左下角的细胞是细菌?是否有合理的对照说明这一点?细菌比细胞一般小得多,它在FSC-SSC上的位置更靠左下,但是这个位置很可能是碎片的噪声,而非你想检测的细菌,BD的试剂盒子是检测细胞的吗?可能拿来做细菌要摸索一下条件,FITC标记的是什么?谢谢您的回复,我刚开始做流式细胞,很多地方不懂,这个图是实验室的老师给做出来的,他之前也没有做过细菌,做细胞很多,按照做细胞的经验取的左下角,BD的试剂盒是AnnexinV-FITC/PI双染测细胞凋亡的,如果是碎片,有没有什么办法检测到细菌,条件应该怎么摸索呢?我觉得首先要证明你收到的信号确实是来自于细菌的,可以跟流式的老师交流下,一般细菌小,所以需要的阈值低一些,不过检测细菌是没问题的,可以以纯水为对照,两管比较一下就知道了,多思考多看书老师也不太确定信号是不是细菌的,纯水对照我一会跟老师说一下,谢谢您的思路!......祝顺利!多交流!
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dxy_bev82n3
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谢谢您!
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蓝魔泪水
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赶紧不懂啊!
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愤怒的烟酒生
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1.你这个流式做的很差。FSC和SSC的图可以明显看出,原因有可能是没有分散好,细胞成团了。2.图二看上去似乎你也没有调补偿?总之你这个结果没有什么参考意义。
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young74361
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细菌也会凋亡么?
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