甲醛变性凝胶电泳鉴定RNA实验一凝胶电泳法
| 实验方法原理 | 琼脂糖凝胶电泳作为鉴定大分子物质经常被使用,但含有RNase酶活性,因此要使RNase变性而不使RNA变性的,故采用甲醛变性凝胶电泳鉴定RNA。 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | RNA 试剂、试剂盒 | MOPS乙酸钠EDTA蔗糖EDTA溴酚蓝二甲苯青甲醛 仪器、耗材 | 电泳槽电泳仪 实验步骤 | 1. 制备凝胶:琼脂糖浓度1.2%,加入5×甲醛凝胶电泳缓冲液和甲醛,使两者的终浓度分别为1×甲醛凝胶电泳缓冲液和2.2mol/L; 2. 取一定量的RNA样品,加入5×甲醛凝胶电泳缓冲液2.0μl,37%甲醛3.5μl,去离子甲酰胺10.0μl,稍微离心混匀后置65℃水浴15min,然后迅速置于冰浴中5min;加入2.0μl加样缓冲液,稍微离心; 3. 上样前,凝胶在1×甲醛凝胶电泳缓冲液预电泳5min(电压5V/cm); 4.将样品加到凝胶样品孔,以4V/cm电压进行电泳;每隔30min将阴阳电极液混匀,然后继续电泳; 5. 电泳结束后,将胶放入0.5μg/ml的EB溶液中,染色30min;紫外观察。 |
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发布于 ： 2021-09-22
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