④ 浓缩胶缓冲液：称取1mol/L HCl 48ml，Tris5.98g，TEMED 0.46ml，加重蒸水至80ml,调pH6.7，用重蒸水定容至100ml，置棕色瓶内，4℃贮存。
⑤ 浓缩胶贮液：称Acr10g，Bis2.5g 加重蒸水溶解后定容至100ml，过滤后置棕色瓶内，4℃贮存。
⑥ 40%蔗糖溶液（W/V）
⑦核黄素溶液 核黄素4.0mg，加重蒸馏水溶解，定容至100ml，置棕色试剂瓶内，4℃贮存。

（2）Ph8.3 Tris-甘氨酸电极缓冲液
称Tris6.0g，甘氨酸28.8g,加蒸馏水至 900ml，调pH8.3后，用重蒸水定容至1000ml，置试剂瓶中，4℃贮存，临用前稀释10倍。
（3）0．1%溴酚蓝指示剂
（4）染色液 染色液种类较多，染色方法也不完全相同。本实验采用0.05%考马斯亮蓝R250染色液中，含20%磺基水杨酸，其优点是染色、固定同时进行，背景易脱色。0.5%考马斯亮蓝R250的20%磺基水杨酸染色液：考马斯亮蓝0.05g，磺基水杨酸20g，加蒸馏水至100ml，过滤后置试剂瓶内保存。
（5）脱色液 7%乙酸溶液
（6）保存液 甘油10ml，冰乙酸7ml，加蒸馏水至100ml。
（7）1%琼脂（糖）溶液 琼脂（糖）1g，加已稀释10倍的电极缓冲液，加热溶解，4℃贮存，备用。
3．器材 电泳仪 夹心式垂直板电泳槽。

（三）操作方法
1．安装夹心式垂直板电泳槽
夹心式垂直板电泳槽操作简单，不易渗漏。这种电泳槽两侧为有机玻璃制成的电极槽，两个电极槽中间夹有一个凝胶模，该模由一个上框形凝胶框、长与短玻璃板及样品槽模板（梳子）所组成。电泳槽由上储槽（白金电极在上或面对短玻璃板），下储槽（白金电极在下或面对长玻璃板）和回纹状冷凝管组成。两个电极槽与凝胶模间靠储液槽螺丝固定。
（1）将已插好玻璃板的凝胶模平放在上储槽上，短玻璃板应面对上储槽。
（2）将下储槽的销孔对准已装好螺丝销钉的上储槽，双手以对角线的方式旋紧螺丝帽。
（3）将已插好玻璃板的凝胶模平放在上储槽上，短玻璃板应面对上储槽。
（4）将下储槽的销孔对准已装好螺丝销钉的上储槽 ，双手以对角线的方式旋紧螺丝帽 。
（5）竖直电泳槽，在长玻璃板下端与硅胶模框交界的缝隙内加入已融化的1%琼脂（糖）。其目的是封住空隙，凝固后的琼脂（糖）中应避免有气泡。
2．配胶
① 分离胶 20ml pH8.9 7.0 %PAA溶液中，凝胶缓冲液（pH8.9）2.5ml，分离胶贮液 5.0ml，重蒸馏水2.5ml，充分混匀，抽气10min，最后加AP 10 ml。
② 浓缩胶 pH6.7 25% PAA：浓缩胶缓冲液∶浓缩胶贮液∶40%蔗糖溶液∶核黄素溶液按1∶2∶4∶1的比例混合。
3．制备凝胶板
不连续体系采用不同孔径及pH的分离胶与浓缩胶 ，凝胶制备应分2步进行。
① 分离胶的制备：根据实验要求，选择最终丙烯酰胺的浓度，本实验需 20ml pH8.9 7.0 %PAA溶液，其加胶方式不同于连续系统。混合后的凝胶溶液，用细长头的滴管加至长、短玻璃板间的窄缝内，加胶高度距样品模板梳齿下缘约1cm。用1cm注射器在凝胶表面沿短玻璃板边缘轻轻加一层重蒸水（约3-4mm）用于隔绝空气，使胶面平整。为防止渗漏，在上、下储槽中加入略低于胶面的蒸馏水。约30-60min凝胶完全聚合，则可看到水与凝固的胶面有折射率不同的界线。用滤纸条吸去多余的水，但不要碰破胶面。如需预电泳，则上、下储槽的蒸馏水倒去，换上分离胶缓冲液，10mA电流电泳1h，终止电泳后，弃去分离胶缓冲液，用注射器取浓缩胶缓冲液洗涤胶面数次，即可制备浓缩胶。
② 浓缩胶制备：浓缩胶为pH6.7 25% PAA，混合均匀后用细长的滴管将凝胶溶液加到长、短玻璃板的窄缝内（即分离胶上方），距短玻璃板上缘0.5cm处，轻轻加入样品槽模板。在上、下储槽中加入蒸馏水，但不能超过短玻璃板上缘。在距离电极槽10cm处，用日光灯或太阳照射，进行光聚合，但不要造成大的生温。在正常情况下，照射6-7min，则凝胶由蛋黄透明变成乳白色，表明聚合作用开始。继续光照30min，使凝胶聚合完全。光聚和完成后放置30-60min，轻轻取出样品槽模板，用窄条滤纸吸去样品凹槽中多余的液体，加入稀释10倍pH8.3的Tris-甘氨酸电极缓冲液。使液面没过玻璃板约0.5cm，即可加样。