免疫电泳试验
实验方法原理 | 免疫电泳试验是凝胶电泳与双向免疫扩散相结合的免疫化学技术。应用琼脂进行免疫电泳试验可分为以下二个步骤: 1.琼脂电泳 将待检的可溶性物质在琼脂板上进行电泳分离,由于各种可溶性蛋白分子的颗粒大小、质量与所带电荷不同,在电场的作用下,其带电分子的运动速度(迁移率)具有一定规律,因此通过电泳能够把混合物中的各种不同成分分离开来。以血清为例(图4-12A),电泳后各种成分的位置是电泳速度与电渗速度的代数和。白蛋白分子量较小,所带负电荷较强,泳动最快,依次为α1、α2及β球蛋白,γ球蛋白泳动最慢。 2.琼脂扩散 当电泳完毕后,在琼脂板一端挖一条长的槽,加入相应抗血清,置湿盒内让其进行双向扩散。在琼脂板中抗原和抗体互相扩散,当两者相遇且比例适合时,可形成不溶性抗原抗体复合物,出现乳白色的特异性沉淀弧线(图4-12B、C)。 | ||||||||||
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实验材料 | 待检血清 试剂、试剂盒 | 巴比妥缓冲液人IgG兔抗人血清抗体 仪器、耗材 | 琼脂载玻片打孔器电泳仪电泳槽万用电表 实验步骤 | 1.琼脂板的制备 将洁净之载玻片置于水平台面上,用吸管吸取4ml1.2%热溶的琼脂于载玻片上,待凝固后按图4-13打孔及开槽。 2.加样 挑去孔中琼脂,用微量加样器于上孔加待检血清15μl,下孔加IgG溶液(lmg/ml)15μl。 3.电泳 置电泳槽中,用三层纱布作电桥,将近孔的一端连接阴极,另一端接阳极,以端电压6V/cm电泳1~2h。 4.扩散 电泳后挑去长槽内琼脂,用热溶的1.2%琼脂封底。然后于槽中加入兔抗人血清抗体,置湿盒内,于37℃温箱中扩散24h,连续观察结果,至沉淀弧线完全清晰为止。 注意事项 | 1.操作时动作要迅速小心,挖槽时要注意平行整齐,加入抗体不要外溢。 2.抗原抗体比例要适合。 3.对分子量过小的抗原(如游离Ig轻链)要随时观察结果。 4.有时抗原抗体反应形成的沉淀线很弱,肉眼不易观察,可以染色。 其他 | 观察并描记沉淀弧的数目、位置及形状,参照免疫球蛋白迁移范围示意图(图4-14),识别主要Ig。 |
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发布于 : 2021-08-18
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