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免疫电泳试验
来自 : 蚂蚁淘
实验方法原理免疫电泳试验是凝胶电泳与双向免疫扩散相结合的免疫化学技术。应用琼脂进行免疫电泳试验可分为以下二个步骤:

1.琼脂电泳 将待检的可溶性物质在琼脂板上进行电泳分离,由于各种可溶性蛋白分子的颗粒大小、质量与所带电荷不同,在电场的作用下,其带电分子的运动速度(迁移率)具有一定规律,因此通过电泳能够把混合物中的各种不同成分分离开来。以血清为例(图4-12A),电泳后各种成分的位置是电泳速度与电渗速度的代数和。白蛋白分子量较小,所带负电荷较强,泳动最快,依次为α1、α2及β球蛋白,γ球蛋白泳动最慢。


2.琼脂扩散 当电泳完毕后,在琼脂板一端挖一条长的槽,加入相应抗血清,置湿盒内让其进行双向扩散。在琼脂板中抗原抗体互相扩散,当两者相遇且比例适合时,可形成不溶性抗原抗体复合物,出现乳白色的特异性沉淀弧线(图4-12B、C)。
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
1.琼脂板的制备 将洁净之载玻片置于水平台面上,用吸管吸取4ml1.2%热溶的琼脂于载玻片上,待凝固后按图4-13打孔及开槽。

2.加样 挑去孔中琼脂,用微量加样器于上孔加待检血清15μl,下孔加IgG溶液(lmg/ml)15μl。

3.电泳 置电泳槽中,用三层纱布作电桥,将近孔的一端连接阴极,另一端接阳极,以端电压6V/cm电泳1~2h。

4.扩散 电泳后挑去长槽内琼脂,用热溶的1.2%琼脂封底。然后于槽中加入兔抗人血清抗体,置湿盒内,于37℃温箱中扩散24h,连续观察结果,至沉淀弧线完全清晰为止。

注意事项
1.操作时动作要迅速小心,挖槽时要注意平行整齐,加入抗体不要外溢。

2.抗原抗体比例要适合。

3.对分子量过小的抗原(如游离Ig轻链)要随时观察结果。

4.有时抗原抗体反应形成的沉淀线很弱,肉眼不易观察,可以染色。

其他
观察并描记沉淀弧的数目、位置及形状,参照免疫球蛋白迁移范围示意图(图4-14),识别主要Ig。

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