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单向聚丙烯酰胺凝胶电泳实验一CTABPAGE实验
来自 : 蚂蚁淘
实验方法原理该方案由方案蛋白质的SDS-PAGE实验中介绍的标准SDS-PAGE衍变而来。虽然在进行变性凝胶电泳时多选用SDS-PAGE,但阴禽子去污剂SDS仍然存在一些局限。例如,SDS在低温下会结晶,某些情况下还会使蛋白质聚集或沉淀,而且有些蛋白在SDS凝胶中不能很好地溶解或者出现异常的迁移现象。这些情况下,可选择采用阳离子去垢剂进行PAGE。这里讲到的不连续、阳离子去垢剂PAGE方法参照了Atkins等(1992)。这个系统中使用的是阳离子去垢剂CTAB(十六烷基三甲基溴化铵),其浓缩胶以两性离子精氨酸(作为浓缩溶液)和tricine[N-三(羟甲基)甲基甘氨酸]为缓冲体系。如果样品没有经过煮沸和外加还原剂,一些由CTAB电泳系统分离的蛋白质仍保持其酶学活性。
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
1.按照蛋白质的SDS-PAGE实验制备凝胶,但浓缩胶和分离胶用本文配方。

2.往上下缓冲液槽中注满IXtricine电泳缓冲液。

3.室温下将蛋白样品溶解在50ulCTAB上样缓冲液中,终浓度为5mg/ml。如果不考虑样品的生物学活性,可将其在有2%巯基乙醇存在下置沸水浴中加热3min。

4.将样品加人上样孔。

5.100V开始浓缩胶部分的电泳,注意电泳是从阳极到阴极。

6.当样品迁移至分离胶时,将电压升至150V。

7.当染料前沿到达凝胶底部时,关掉电源,停止电泳。
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