固相化 pH 梯度双向凝胶电泳实验一方案4 双向凝胶电泳脑脊液蛋白样品的制备实验
| 实验方法原理 | 可用乙醇沉淀人类脑脊液以浓缩其中的蛋白质和除去盐分，否则这些物质会干扰第一向IEF。 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 人类脑脊液 试剂、试剂盒 | 乙醇NaOH增溶溶液β-巯基乙醇 仪器、耗材 | 离心管冷冻离心机超声波仪 实验步骤 | 1.在室温下解冻脑脊液样品。当样品解冻后，旋紧试管盖，再用旋涡混合器振荡试管。 2.样品溶解时，在15ml离心管及盖上标记所处理样品的名称 3.将1ml脑脊液和9ml乙醇加人15ml离心管中混合。
4.将离心管的盖拧紧，振荡，-20°C储存过夜。 5.5000g4°C，离心5min。 6.将上清倒入指定的废物缸。在不吸出沉淀的前提下，用200ul吸头尽可能转移走剩余的乙醇，不让吸头接触沉淀。 7.将离心管放在通风橱在空气中干燥10~20min，但不能让沉淀彻底干燥。 8.在每个试管中加人100ul增溶溶液，加24泠巯基乙醇，旋紧试管上的盖，用旋涡混合器振荡试管，在室温下放置30mm。 9.超声处理样品30s。 10.5000g、4°C，离心5min。 11.将每份上清液转移到新试管中，检测每份上清的蛋白质浓度。 蛋白质浓度会随脑脊液样品的不同而变化，但是使用25W的这种溶液，就能通过银氨染色的双向凝胶电泳有效检测到蛮白质。 12.若样品不立即用于IEF，将其按每份100ul分装，储存在一80°C。样品的冻融只能进行一次，以避免多次反复冻融所产生的副作用。 13.继续按方案5进行第一向IEF。 |
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发布于 ： 2021-09-16
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