电泳分离的蛋白质肽谱和序列分析实验一方案1 蛋白质的过甲酸氧化实验
| 实验材料 | 冻干的纯化蛋白样品 试剂、试剂盒 | 甲酸氢溴酸过氧化氢NaOH固体 仪器、耗材 | 旋转蒸发器小试管 实验步骤 | 1.加入100ul过氧化氢到900ul甲酸中，在室温下放置让，将反应产生过甲酸(HCOOOH)。 2.在冰上冷冻过甲酸至0°C。 3.在预冷的小试管中，将蛋白质溶解于50ul过甲酸中（500ug/ml)。 4.盖上帽子，0°C孵育混合物4h。如果蛋白质不溶，把反应延长到20h。 5.加入30ul氢溴酸，去除多余的过甲酸。 要特别小心，可能会释放出来少量的溴。 6.用旋转蒸发器或离心冷冻干燥机彻底干燥样品。在浓缩器中加入少量的NaOH固体，以去掉多余的溴和甲酸。蒸发干燥约需要10min。 由于许多氨基酸被修饰，推荐用过甲酸氧化的蛋白质用于S—S/S—H(半胱磺酸）和甲硫氨酸基团（甲硫氨酸砜）的定量分析，而不是序列分析。 |
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发布于 ： 2018-08-05
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