毛细管电泳法分析单链构象多态性实验一基本方案3 应用ABI PRISM 3100基因分析仪的自动化毛细管芯片电泳
| 实验材料 | PCR产物5%非变性引物 试剂、试剂盒 | 10X基因分析仪缓冲剂Milli-Q级别的超纯水 仪器、耗材 | ABIPRISM3100基因分析仪基因扫描毛细管芯片 实验步骤 | 1.安装一个16通道的芯片（50cmi.d.)使之与探头距离36cm。根据制造商说明书将设备做好正常运行的准备。吸管内吸入5%非变性引物，在缓冲腔内注人IX基因分析仪缓冲剂。准备样品板。将管放入样本槽。 2.在18°C、25°C和35°C运用三种运行组件运行毛细管电泳，使用以下参数。 加入时间：IOs 加入电压：3kV 运行电压：53kV 运行时间：25min 使用设置为D的滤光镜检测FAM、HEX、ROX指示。 3.根据制造商说明书使用基因扫描分析软件分析结果。对每一个电泳温度设定一个大小标准。这些标准里的峰值是由扫描点除以10来确定的（扫描点为3550的峰值是355)。使用DNA固有的大小标准来校准这些峰值。将未知样本与具有已知DNA序列的正常样本比较。另外也可以根据制造商说明书使用基因分型软件执行自动化数据分析。 4.用未标记的引物再次放大具有分离的峰值或异常的色移的样本，并且通过DNA测序检测突变（单元7.5)。 |
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发布于 ： 2018-08-06
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