由非变性凝胶电泳迁移率法评估均一性实验
| 试剂、试剂盒 | 核心RNA聚合酶核心RNA聚合酶-σ32复合物σ32非变性胶样品缓冲液储存缓冲液考马斯亮蓝（CBB)染色液脱色液 仪器、耗材 | 非变性凝胶电泳装置 实验步骤 | 材料与设备 核心RNA聚合酶 核心RNA聚合酶-σ32复合物，由免疫亲和柱洗脱所得 σ32，由POROS50S阳离子交换柱洗脱所得 非变性凝胶电泳装置 试剂 非变性胶样品缓冲液（2X)(同SDS样品缓冲液，但不含SDS。) 储存缓冲液 考马斯亮蓝（CBB)染色液 脱色液 (配方，见"试剂的配制"，PP.184~189) 操作程序 1)制备非变性胶（如，4%?12%胶），带10个泳道。 注：有几家制造厂商（如，NOVEX)出售的供SDS-PAGE用的梯度Tris-甘氨酸小胶(minigel)实际上是不含SDS的。逋常，电泳过程中SDS是从电极液和样品缓冲液进入凝胶的，只要这些缓冲液中不含SDS,这些凝胶就能相当容易地以非变性的方式进行电泳。 2)取各蛋白质样品1~10ul,加入5~9ul的储存缓冲液中，再加10~20ul的2X非变性胶样品缓冲液。混匀。建议按下表列出将各样品及其合适的蛋白量。  3)每孔各加20ul样品，跑电泳，CBB染色后脱色。 注：高效液相色谱(HPLC)法中的凝胶排阻色谱法也可用来测定蛋白质大小的不均一性。如本单元方案补充实验一节所述。 |
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发布于 ： 2018-08-10
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