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Biorad转膜仪,bactin用180mA转1h,合适吗?
2021-07-31
问题描述:

我们同学b-actin用175mA转半小时,结果很好,但不是用的Bio-Rad转膜仪,我昨天用的180mA转1h,立春红染色条带很清楚,但ECL曝光后什么条带也没有!我看到帖子上有的转20KD以下的蛋白都用到300mA1h,是不是我转膜的时间不够?今天又做了一次,一会转膜,请高手们提提建议。

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笨木木
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b-actin分子量是42KD,如果你用的是Bio-rad半干转膜仪,可以用恒压20V,25-30min就可以了,很快,效果也很好。
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claybird
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谢谢笨木木!我用的是Bio-Rad湿法转移,转移缓冲液是重复了一次的,180mA转1h,比第一次转的时候电压要低(可能是重复利用的原因),结果我把转膜后的胶考染了一下,发现没有转移完全,胶上还有很多很多条带,只是颜色浅了一些,立春红染膜条带能看清楚,但不是很亮,我现在正用二抗孵育,不知结果如何。我同学用175mA半小时就好,仪器不同会差别这么大吗???
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claybird
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笨木木b-actin分子量是42KD,如果你用的是Bio-Rad半干转膜仪,可以用恒压20V,25-30min就可以了,很快,效果也很好。今天用20V转了30min,考染转过的胶发现条带还很清楚!立春红染膜也有条带,不是很清晰。不知你们做的时候是不是这样?今天第一次用Bio-rad半干转膜仪,用20V的时候发现电流只有50mA,是不是不正常?
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