WB 转膜条件推荐
为利于更好的实验效果，不同蛋白，转膜条件略有不同，迪申生物技术（上海）有限公司专注于生产免疫组化相关产品多年，对WB实验有一定了解，今天跟各位同学一起分享下实验过程中发现的不同蛋白的转膜条件。
蛋白来源：RAW264.7总蛋白
蛋白名称：一些转录因子
蛋白分子量：40~70KD
WB用膜类型、孔径：0.45NC
转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流400mA
转膜时间：60~90min
PS.其实吧，以我的经验来看，除非目的蛋白特别小，或者特别大，不然转膜时间真的不是那么重要，曾经因为失误，转了15min就拆下来了，但从丽春红染色来看，跟平常实验也没有太大的区别。
蛋白来源：内皮细胞总蛋白
蛋白名称：occludin&AKT
蛋白分子量：65KD&56KD
WB用膜类型、孔径：0.45PVDF
转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压100V
转膜时间：60~70min
设备名字是「Bio-Radmini」。
蛋白来源：肿瘤手术标本
蛋白名称：转录因子
蛋白分子量：33KDa
WB用膜类型、孔径：PVDF膜
转膜方式（恒压、恒流）：350mA恒流
转膜时间：150min
转膜设备：湿转Bio-Rad
说明：相同条件曾用于数个30-70KDa的蛋白，都能成功转上，不过没有试缩短时间效果如何；实验时没为转膜条件苦恼，倒是电泳时胶的浓度及时间根据不同分子量而有区别。
蛋白来源：成纤维细胞
蛋白名称：smad3
蛋白分子量：54KDa
WB用膜类型、孔径：PVDF膜
转膜方式（恒压、恒流）：350mA恒流
转膜时间：150min
转膜设备：湿转Bio-Rad
蛋白来源：肿瘤细胞
蛋白名称：磷酸化蛋白
蛋白分子量：10-200KDa
WB用膜类型、孔径：MilliporePVDF膜0.45um
转膜方式（恒压、恒流）：120v恒压
转膜时间：120min
转膜设备：湿转Bio-Rad
蛋白来源：Hepg2
蛋白名称：EGFR
蛋白分子量：170kd
WB用膜类型、孔径：pvdf0.45
转膜方式（恒压、恒流）：24V
转膜时间：2个半小时
转膜设备：伯乐半干转
蛋白来源：肝癌细胞
蛋白名称：HIF-1α
蛋白分子量：120kD
WB用膜类型、孔径：NC膜
转膜方式（恒压）：80伏，湿转
转膜时间：150分钟
设备：「Bio-Radmini」
建议：湿转，转膜液特别重要，否则会导致电压或者电流不稳影响转膜条带。转膜均现配先用，不重复利用。转膜时间一般是150分钟，80伏恒压。经李春红染色，靠近蛋白胶的一侧膜上蛋白染色深，膜另外一面染色浅，说明蛋白未转过。该湿转条件自己做过的蛋白分子量范围：170-36kD。
蛋白来源：肺脏
蛋白名称：ICAM-1
蛋白分子量：85~110KD
WB用膜类型、孔径：0.22NC
转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流300mA
转膜时间：120min
设备名字Bio-Radmini
一抗用的santacruz1mL包装的。比例调整到1：800做出很好的条带。效价会一直降低的。去年做的这个指标，今年夏天做就不行了。
蛋白来源：人肿瘤细胞
蛋白名称：磷酸化蛋白
蛋白分子量：30-60KDa
WB用膜类型、孔径：pallNC膜0.45um
转膜方式（恒压、恒流）：恒流0.85-1mA/平方厘米膜
转膜时间：60-90min
转膜设备:北京六一半干转
建议：转膜缓冲液用新鲜配制的，可先配成2倍的母液，转膜液的多少会影响电转的效率，一般将吸水纸润湿即可，不要和膜一起浸泡，这样效果很好。
蛋白来源：人肝癌肿瘤细胞
蛋白名称：notch
蛋白分子量：60-120KDa
WB用膜类型、孔径：pallNC膜0.45um
转膜方式（恒压、恒流）：恒流0.3A
转膜时间：-20度冰柜120min
转膜设备:湿转Bio-Rad
建议：转膜缓冲液用新鲜配制的，可先配成10倍或5倍的母液，保持低温是转膜效果的一个保证，这样效果很好。
蛋白来源：肺脏、肝脏等。
蛋白名称：actin
蛋白分子量：43kD
WB用膜类型、孔径：NC膜PALL0.22um
转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流200mA
转膜时间：45~60min
设备名字Bio-Radmini
用的santacruz分装和整装的都可以。效价一般1：1000-1：3000左右，可稳定较长一段时间。
蛋白来源：细菌蛋白
蛋白名称：全部的可溶性蛋白
蛋白分子量：11-170KD
WB用膜类型、孔径：0.45NC
转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流300mA
转膜时间：80min
蛋白来源：骨肉瘤CELLLINE
蛋白名称：Betaactin
蛋白分子量：42kDa
WB用膜类型、孔径：NitrocelluloseMembrane0.2umPoreSize(Invitrogen)
转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒压22v
转膜时间：90min
转膜设备：X-cellSureLockMini-cell(Invitrogen)
建议改进方向：转膜过程冰水浴，保持低温，TransferBuffer重复使用。
蛋白来源：肾瘤细胞
蛋白分子量：39kDa
WB用膜类型、孔径：NitrocelluloseMembrane0.2umPoreSize(Invitrogen)
转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压100v
转膜时间：50min
蛋白来源：pichia分泌表达
蛋白名称：细胞因子等
蛋白分子量：17到30kDa
WB用膜类型、孔径：milliporePVDF0.45um
转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压：100V
转膜时间：60min
这个条件除了100KDa的预染maker转的不好，剩下的条带都非常清晰。正向前面ycwzq说的，感觉时间不是很重要，只要蛋白别太小或太大，在一个比较宽的时间和电压范围都能转上。当然这些还有一个重要的影响因素就是所用的蛋白转印缓冲液。
蛋白来源：小鼠前列腺癌细胞
蛋白名称：P53P21RAD51GAPDH
蛋白分子量：53KDa、21KDa、37KDa、36KDa
WB用膜类型、孔径：PVDF膜0.45
转膜方式（恒压、恒流）：恒压110v
转膜时间：60min
转膜设备:湿转Bio-Radmini
蛋白来源：来自MDCK增殖的流感病毒裂解物
蛋白名称：PB1
蛋白分子量：96kd（注意，10%SDS-PAGE，冰上电泳。用预染Marker观察100kd的条带跑到胶的正中间位置时，才开始转膜，否则转膜效率降低）
WB用膜类型、孔径：NC膜，0.45
转膜方式（恒压、恒流）：恒压，100V
转膜时间：2hours
转膜设备:BIO-rad转膜设备。其间，准备一个冰盒，将电泳槽半埋到冰里。
转膜液的配制：（如甲醇的比例和是否加SDS以及多大质量浓度等）：2.9g甘氨酸，5.8gtris，0.37gSDS，200ml甲醇。
蛋白来源：软骨细胞
蛋白名称：b-actin
蛋白分子量：43kd
WB用膜类型、孔径：PVDF膜，0.45
转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流，350mA
转膜时间：85min
转膜设备:BIO-rad转膜设备。其间，准备一个冰盒，将电泳槽半埋到冰里。
转膜液的配制：（2.92g甘氨酸，5.8gtris，0.375gSDS，200ml甲醇，用双蒸水定容到1L）
蛋白来源：HepG2细胞
蛋白名称：Akt及P-Akt
蛋白分子量：55KDa/56KD
WB用膜类型、孔径：PVDF膜0.45孔径
转膜方式（恒压、恒流）：100V恒压
转膜时间：75min
转膜设备:湿转Bio-Rad
蛋白来源：大鼠
蛋白名称：Bactin（42KDa）
WB用膜类型、孔径：PVDF（0.45）膜
转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流150mA
转膜时间：100min
转膜设备:北京六一
蛋白来源：大鼠大脑皮质
蛋白名称：b-actin
蛋白分子量：43kd
WB用膜类型、孔径：PVDF膜，0.45
转膜方式（恒压、恒流）：半干转，恒流，2mA/cm2
转膜时间：8-55min
转膜设备:BIO-rad转膜设备。
转膜液的配制：（2.92g甘氨酸，5.8gtris，0.375gSDS，200ml甲醇，用双蒸水定容到1L）
编辑：wch吴春晖
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发布于 ： 2021-09-20
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