【求助】转化毕赤酵母的方法,没有电转仪啊!
2005-06-25
问题描述:
园里的朋友有没有做过酵母转化的啊,能不能提供一些比较详细的介绍酵母转化的文献啊,最好本人实践过证明可行,可怜实验室没电转仪。
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genelabgcb
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俺们都是用电转仪的,没有你就比较麻烦了。还有个方法是原生质体融合,不过你还是买电转仪把,分子生物学的东西一般是很耗钱的。你不肯花钱就不能做实验,这是肯定的。由于酵母有结构复杂的细胞壁,所以最早用于酵母载体DNA转化的方法是原生质体法。Ito等(1983)将酵母细胞进行各种离子溶液的处理,然后进行DNA转化,发现一价碱性阳离子Cs+、Li+能明显地增加外源DNA的吸入,首次实现了完整酵母细胞的DNA转化。粒子轰击也能用于酵母细胞的转化以上实验都没有做过,你可以想办法试试!
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sooow
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实验室是没有的东西买了一大堆,可移动超静工作台,就是个玻璃的大球,5000美金买了两个,灭菌锅,一大一小,一个4000多,一个8000多美金pH计都1300美金两个,水浴锅2700美金两个,旋转蒸发仪14000美金两个!!该有的却没有!制冰机,荧光分光光度计,电转仪!!!
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genelabgcb
用户
俺们都是用电转仪的,没有你就比较麻烦了。还有个方法是原生质体融合,不过你还是买电转仪把,分子生物学的东西一般是很耗钱的。你不肯花钱就不能做实验,这是肯定的。由于酵母有结构复杂的细胞壁,所以最早用于酵母载体DNA转化的方法是原生质体法。Ito等(1983)将酵母细胞进行各种离子溶液的处理,然后进行DNA转化,发现一价碱性阳离子Cs+、Li+能明显地增加外源DNA的吸入,首次实现了完整酵母细胞的DNA转化。粒子轰击也能用于酵母细胞的转化以上实验都没有做过,你可以想办法试试!
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quest
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我做的是酿酒酵母转化,不知对你有没有帮助,我们采用的是醋酸锂转化法,转化效率还可以,而且醋酸锂试剂容易买到,具体方法可以看精编分子生物学实验指南,2001,科学出版社,page:509
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quest
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而且我们也做过电转化,在外面作的,结果没有成功,他们做的到是赤壁酵母。
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tnfsf10
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还是用电转化吧!我做过,不是电转的。由于酵母细胞有细胞壁,所以用通常的转化几乎是不可能的。现在常用的方法有4中:氯化锂法,醋酸锂法,原生质体法,电转化法。其中转化效率最高的是电转化法,当然你转化的目的也是为了得到有多个基因整合的酵母菌,这其中也是电转化法得到的几率最高。再就是原生质体法了,也不错,就是麻烦一点,还有破酵母细胞壁的酶,中文名是酶解酶,有点贵,北京的一个公司有代理,具体我不记得了。最后,还是建议你用电转化吧。
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