【求助】关于液体培养基pH值灭菌后酸碱度变化的问题

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2005-08-25

问题描述：

:)
我在做一细菌不同酸碱度生长状况时,发现这些奇怪现象:pH=3的培养基灭菌(TSB液体培养基)灭菌后pH上升到到9.2!而原来pH=9.0的降到8.7(基本没多少变化),请问各位大侠,这是什么原因?

一般做不同酸碱度生长实验时,该如何才能防止pH在湿热灭菌后基本不变化?

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mars747

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难道只能先灭菌后调酸碱度?

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andonyo001

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pH=3的培养基灭菌(TSB液体培养基)灭菌后pH上升到到9.2TSB培养基（TrypticSoyBroth）其主要的成分为bactotryptone17gbactosoytone3gbactodextrose2.5gsodiumchloride5gdipotassiumphosphate2.5gwater1l——摘自国立中山大学生物科学研究所博士论文http://etd.lib.nsysu.edu.tw/ETD-db/ETD-search/getfile?URN=etd-0824104-171753&filename=etd-0824104-171753.pdf这pH怎么会是3呢？是操作失误吧？况且，也没有这么大相差的，除非培养基里面的成分会发生中和反应。原来pH=9.0的降到8.7这个很正常了，一般都会遇到。一是灭菌前测量时温度一般比较高，此时测pH值，在pH7.0以上时，结果会比实际小，温度越高，偏差越大（可以从pH计标准缓冲液所提供的数据即可略知端倪）；二是培养基里面的成分经过灭菌后会发生一定程度的变化。因此，为有效避免pH灭菌前后的偏差，可以将灭菌前测定pH值的温度尽量降至pH计标准温度（或者给以温度补偿），一些容易因为高温而被破坏的成分应该分开灭菌，或者过滤除菌。

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mars747

用户

没有,我是用盐酸故意调节到pH=3,来测定细菌的生长情况的!设了如下梯度,pH=3,pH=4.5,pH=5.5,一直到10,谢谢你的解释,不过这个3一下升高到9是确有此事,我重复做了一次,还是如此.不知道哪里出了问题.原来酸性的pH普遍升高很大,碱性的变化比较小而且你说的意思我没明白,调低测量温度?我是先灭菌前调的pH,灭完菌待冷却室温,接的种,顺便测了一下pH,发现了如上变化的.....

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mars747

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可能是操作失误,我再重新做一次,谢谢!以前没遇到这么大的变化,因此感觉挺奇怪的.谢谢.

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andonyo001

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而且你说的意思我没明白,调低测量温度?稍微再解释一下，我所说的调低测量温度是指：培养基在配制时要加热溶解，在调节其pH值时不能太早，而应候其降低至合适温度予以测定（pH计温度补偿范围内，越接近室温，结果越可靠。用精密试纸测定时也同样会有影响），原因是温度对pH值的测定结果有影响，温度越高，影响越大。同样，在灭菌后pH值的测定也应该降至适宜温度，予以比较。

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mars747

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谢谢!看来得重新摸索一下适当的灭菌温度,121度有点高

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xwfxwf401

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一般来说，对于液体培养基调过PH值后高压灭菌，PH值变化（培养基中物质不分解）有两种情况：1。如果高压前PH>7.0，灭菌后PH降低0.2左右；2，如果高压前PH<7.0,灭菌后后PH升高0.2左右。当然如果高压的过程中，如果一些物质如氨基酸等分解，那么PH变化则无法确定。所以，不同的培养基配置的过程中，一定要注意培养基的成分是否在高压下分解，从而选择不同的灭菌温度。楼主灭菌后PH由3上升到9，我感觉到，要么是操作有误，要么是确实是一些物质分解了。希望对楼主有所帮助。

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落日长河

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这个问题我也遇到过，不过是降低了。由7。2降到了5。5左右。。呵呵。。没法子，我是把PH先升高一些。。呵呵。。。可以考虑一下灭菌后调节PH，这样会好一些。。

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mars747

用户

嗯,多谢各位高手.我重新做了一次,pH低于7的的确是升高0.1-0.3,但是碱性的下降太大,就像落日长河那样!嘿嘿

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hxscs7611

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一般碱性培养基灭菌前可调高ph0.2，酸性培养基灭菌前不要调高ph待高压灭菌后再重新调节ph便于使用(但要严格无菌操作）因酸性培养基经高压后ph变化较大且某些成分易分解灭菌前后因ph的变化培养基颜色变化也很大。你可试试看。