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【求助】5ulDNA样品和1ul上样缓冲液琼脂凝胶电泳
2021-08-04
问题描述:

同仁好,我想请教一下大家,6Xloddingbuffer1%琼脂糖凝胶电泳TBE缓冲液,5ul
DNA样品和1ul上样缓冲液怎么就是跑不出主带啊?都是弥散带,给点建议我哪里有问题啊?

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xtzj500
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第一,你确定pcr没问题吗?第二,凝胶彻底融好了吗?如果融的不彻底会影响电泳。第三,缓冲液的ph值检测一下。
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水寒冰
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Marker是单还是双啊
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水寒冰
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xtzj500第一,你确定pcr没问题吗?第二,凝胶彻底融好了吗?如果融的不彻底会影响电泳。第三,缓冲液的ph值检测一下。电泳跟PCR有毛关系啊哥哥
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xtzj500
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我不知你跑的dna是哪里来的啊?听你这么说不是pcr产物了?那么是你提取的基因组dna吗?你确定用来跑电泳的样本本身没问题吗?
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fsj1987
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我提取的是15ML漱口水基因组DNA。不是扩增产物。是提取完直接跑得电泳。请多指点
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fsj1987
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凝胶完全溶了。
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东胜聂博
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给个图吧!基因组DNA的图跟你提取的水平有很大的关系,弥散也可能是降解。
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fsj1987
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这个图是天跟提取的漱口水DNA
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fsj1987
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这张是磁珠法提取的基因组DNA
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fsj1987
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大家帮忙分析一下跟我的凝胶电泳有关系吗?我用的是浓度为1%凝胶电泳。
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东胜聂博
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基因组DNA提取出来没有主带也正常,与你用的方法有关。如果用磁珠法,磁珠吸附DNA后没有大力分散(吹打或振荡),就会出现你图中的样子,可能DNA与组蛋白还在结合状态。如果大力分散,可能会出来主带,大小与磁珠和分散力有关(DNA被拉断)。你提DNA的目的是什么,如果只是PCR,短了好。如果有别的用途,需要比较完整的DNA,可以用其他的方法。我以前用过先用温和的方法提取,电泳,然后切胶电泳回收。
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fsj1987
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我用了天跟和磁珠两种方法做得,相对来说磁珠成本比较低一些,现在是实验阶段,就是为了看看磁珠的质量,然后准备用磁珠试剂盒,照您的意思是说我在细胞裂解以后,加入磁珠后吹打的力度不够吗?大小与磁珠和分散力有关(DNA被拉断)。你说大小是指主带的大小吗?
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东胜聂博
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DNA的长度相对于磁珠来讲是大的,因此在磁珠吸附DNA时,会发生一条DNA吸附了好多的磁珠。如果不用力混匀,磁珠就会结块,杂质会去不干净,如果用力混匀,DNA会拉断。一般DNA浓度越高,结块现象越严重。
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fsj1987
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上面这两张是我最近做得也都是漱口水DNA样品凝胶电泳图,图A中1-4号对应图B中的1-4号,这是两个不同的人提得DNA,跑出来得图不一样,就像您所说的提取过程中磁珠聚集在一起的跑出来是图B中的2号,图A中的2号是磁珠是分散开得,会有哪些原因呢?您当时提取的时候用的是谁家的试剂盒啊?跟电泳缓冲液新旧有没有关系啊?你那里有没有跑电泳的图啊?我可以看一下吗?谢谢
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