关于电泳缓冲液,奇怪又好笑的问题
2021-07-31
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灬丨牛牛丨灬
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好在这样子做下去有的时候能出条带,有的时候不能(当然也不排除其他原因)。但总是感觉不放心,各位有什么好的建议吗?感谢。
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灬丨牛牛丨灬
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我是做荧光二抗孵育后Odessy扫膜,不是做ECL,不知道有没有做过这方面的,想求教其他相关问题。
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chenaoke
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是这样的啊,电流是会越来越低的,因为电泳过程溶液中离子发生变化了
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灬丨牛牛丨灬
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chenaoke是这样的啊,电流是会越来越低的,因为电泳过程溶液中离子发生变化了那意思是不用管?
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01晓红帽
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你跑的是恒压,电流变化是正常的,还有就是电泳时不用加冰块降温,转膜时才需要降温。
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chenaoke
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展开引用灬丨牛牛丨灬chenaoke是这样的啊,电流是会越来越低的,因为电泳过程溶液中离子发生变化了那意思是不用管?......不用管,别重复多次使用就行
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灬丨牛牛丨灬
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01晓红帽你跑的是恒压,电流变化是正常的,还有就是电泳时不用加冰块降温,转膜时才需要降温。嗯,好的,谢谢。
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灬丨牛牛丨灬
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展开引用chenaoke灬丨牛牛丨灬chenaoke是这样的啊,电流是会越来越低的,因为电泳过程溶液中离子发生变化了那意思是不用管?不用管,别重复多次使用就行......嗯。好的,谢谢。
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tyh031905119
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温度变化之后,电流会有变化的,红外扫描比ECL简便,真实。
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mxgleva112
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漏液有时也会造成电流下降
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biology-boy
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肯定是漏液了。重新装一下。
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灬丨牛牛丨灬
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BIOLOGy-boy肯定是漏液了。重新装一下。看样子我这个机子漏液严重啊,每次电泳的时候电流都会不断变化。
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灬丨牛牛丨灬
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mxgleva112漏液有时也会造成电流下降我试试看。谢谢你
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灬丨牛牛丨灬
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tyh031905119温度变化之后,电流会有变化的,红外扫描比ECL简便,真实。请教一个问题:如果有两个分子量相近的目的蛋白,能不能贴一块膜?如果能的话,两个蛋白孵一抗和二抗的顺序是什么呢?如果两个目的蛋白的二抗种属不同的话,又当如何呢?谢谢~~~
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tyh031905119
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展开引用灬丨牛牛丨灬tyh031905119温度变化之后,电流会有变化的,红外扫描比ECL简便,真实。请教一个问题:如果有两个分子量相近的目的蛋白,能不能贴一块膜?如果能的话,两个蛋白孵一抗和二抗的顺序是什么呢?如果两个目的蛋白的二抗种属不同的话,又当如何呢?谢谢~~~......不建议放在一起,会相互干扰。非要这么做的话我觉得可以考虑“敷育A抗体_曝光_不膜再生,敷育B抗体_曝光时同时用两个波长”
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灬丨牛牛丨灬
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展开引用tyh031905119灬丨牛牛丨灬tyh031905119温度变化之后,电流会有变化的,红外扫描比ECL简便,真实。请教一个问题:如果有两个分子量相近的目的蛋白,能不能贴一块膜?如果能的话,两个蛋白孵一抗和二抗的顺序是什么呢?如果两个目的蛋白的二抗种属不同的话,又当如何呢?谢谢~~~不建议放在一起,会相互干扰。非要这么做的话我觉得可以考虑“敷育A抗体_曝光_不膜再生,敷育B抗体_曝光时同时用两个波长”......你用的是NC膜还是PVDF膜呢?NC膜的话请问怎么让它活化完全呢(具体方法是怎么样的呢)?再次感谢。
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tyh031905119
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展开引用灬丨牛牛丨灬tyh031905119灬丨牛牛丨灬tyh031905119温度变化之后,电流会有变化的,红外扫描比ECL简便,真实。请教一个问题:如果有两个分子量相近的目的蛋白,能不能贴一块膜?如果能的话,两个蛋白孵一抗和二抗的顺序是什么呢?如果两个目的蛋白的二抗种属不同的话,又当如何呢?谢谢~~~不建议放在一起,会相互干扰。非要这么做的话我觉得可以考虑“敷育A抗体_曝光_不膜再生,敷育B抗体_曝光时同时用两个波长”你用的是NC膜还是PVDF膜呢?NC膜的话请问怎么让它活化完全呢(具体方法是怎么样的呢)?再次感谢。......没用过NC膜,NC膜不用活化吧?
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kmyind
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恒压电流不就是这样么?
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灬丨牛牛丨灬
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展开引用tyh031905119灬丨牛牛丨灬tyh031905119灬丨牛牛丨灬tyh031905119温度变化之后,电流会有变化的,红外扫描比ECL简便,真实。请教一个问题:如果有两个分子量相近的目的蛋白,能不能贴一块膜?如果能的话,两个蛋白孵一抗和二抗的顺序是什么呢?如果两个目的蛋白的二抗种属不同的话,又当如何呢?谢谢~~~不建议放在一起,会相互干扰。非要这么做的话我觉得可以考虑“敷育A抗体_曝光_不膜再生,敷育B抗体_曝光时同时用两个波长”你用的是NC膜还是PVDF膜呢?NC膜的话请问怎么让它活化完全呢(具体方法是怎么样的呢)?再次感谢。没用过NC膜,NC膜不用活化吧?......不活化能用嘛?
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灬丨牛牛丨灬
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kmyind恒压电流不就是这样么?转膜的时候你是恒压还是恒流。哪一个更好点?
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kmyind
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一直做的是恒压,没有做过恒流,恒流难道是过程中不断调整电压?囧,这个过程还真没有深究过
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灬丨牛牛丨灬
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kmyind一直做的是恒压,没有做过恒流,恒流难道是过程中不断调整电压?囧,这个过程还真没有深究过转膜的时候还真有人做恒流的。
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小七爱帮主
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同上,恒压电泳电流就是这么变得啊……电流只要不过高就没什么问题
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dong3504269
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很正常,而且跑到分离胶的时候应该还会进一步降低吧?选择恒压跑的话,我的经验是电流在16mA之上都是OK的,再低的话就有问题了
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shylook
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这种buffer为什么不自己配呢
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灬丨牛牛丨灬
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dong3504269很正常,而且跑到分离胶的时候应该还会进一步降低吧?选择恒压跑的话,我的经验是电流在16mA之上都是OK的,再低的话就有问题了嗯,确实如你所说,那么还有一个问题要请教:转膜的时候您是恒压还是恒流呢?请教您的条件~有没有68KD39KD25KD大小分子量的经验?谢谢~~
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笑里藏刀love
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展开引用灬丨牛牛丨灬kmyind一直做的是恒压,没有做过恒流,恒流难道是过程中不断调整电压?囧,这个过程还真没有深究过转膜的时候还真有人做恒流的。......我这边做转膜就是恒流,并不需要一直电压的,其实和恒压跑PAGE胶是一样的。我们所谓的恒压电泳,是设定电压,默认电流限定值大于电泳槽可能用到的电流值,所以电压不变,电流会随着离子,温度等环境变化(电阻有没变就不知道了,我不是学物理的)。而恒流转膜的时候,我们是让电压限定值大于可能用到的电压值,然后设定电流,转膜的过程中电压也会略微浮动,刚开始转的时候电压会比较低,慢慢涨到差不多就不怎么跳动了
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dong3504269
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展开引用灬丨牛牛丨灬dong3504269很正常,而且跑到分离胶的时候应该还会进一步降低吧?选择恒压跑的话,我的经验是电流在16mA之上都是OK的,再低的话就有问题了嗯,确实如你所说,那么还有一个问题要请教:转膜的时候您是恒压还是恒流呢?请教您的条件~有没有68KD39KD25KD大小分子量的经验?谢谢~~......嗯…这几个分子量相近的我都做过,我的方案是湿转,恒流,0.2A,2h。你可以试一下
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