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19秋中国医科大学《生物化学(本科)》在线作业【满分答案】奥鹏...
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在临床上,70%以上的入院、出院或者治疗决策都是医生根据患者的实验室检查结果做出的。而这些实验室检查结果的判读绝大部分都是与健康「参考」人群对比得出。对于成年人来说,同一个「参考」人群可能可以适用好几十年。然而,对于新生儿、婴幼儿和青少年来说,必须使用不同的「参考」人群,来反映其生长发育过程中快速发生的生理变化。

制定儿科的参考区间十分困难。因为,首先,需要招募大量的参与者以确定参考区间的统计学年龄界限;其次,要获得尽可能多的「健康」人群作为研究对象,再次,从研究对象采集的血液量一般来说是比较少的。这一问题在低月龄儿中尤为显著,婴幼儿特别是新生儿,静脉血管非常细,采血难度非常大,稍有不慎,就极有可能爆发医患矛盾。

尽管困难重重,但还是有许多研究团队积极致力于制定儿童的参考区间,例如美国犹他大学出资赞助的CHILDx(Children’sHealthImprovementthroughLaboratoryDiagnostics)项目,加拿大的CALIPER(CanADIanLaboratoryInitiativeonPaediatricReferenceIntervalsDatabase)项目等。

美国国家儿童研究(TheNationalChildren’sStudy,NCS)作为一项纵向的前瞻性研究,希望通过对10万名从出生到21周岁的青少年儿童进行全面分析,阐明遗传和环境因素对青少年儿童生长发育的影响。

类固醇激素和氨基酸是儿童生长发育过程中重要的调节物质和指标。例如,类固醇激素在第二性征的发育、骨骼和肌肉的生长,以及神经突出、神经髓鞘的形成中发挥关键作用。氨基酸则是机体营养状态、代谢状态、肝脏疾病、糖尿病或者癌症等疾病的重要指标。根据年龄、性别和地区精心制定这些指标的参考区间,将极大促进影响生理、新陈代谢、神经系统等疾病的诊断。

近日,来自华盛顿大学圣路易斯儿童医院的儿科专家们从NCS样本库中获得了310名新生儿(出生一周内)的干血斑(DriedBloodSpot,DBS)样本,试图建立新生儿的参考区间。研究结果发表在近期的ClinicalChemistry杂志上。

研究采用液相色谱-质谱/质谱串联法检测了DBS样本中25种氨基酸和4种类固醇激素的浓度。血液纸片一直保存在-80℃直至分析(以尽可能降低分析物的降解速度)。

根据研究的纳入标准,最终有308例样本进行了氨基酸检测,298例样本进行了类固醇激素的检测。这25种氨基酸分别为苯丙氨酸、酪氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、瓜氨酸、精氨酸、鸟氨酸、高瓜氨酸、丙氨酸、羟脯氨酸、脯氨酸、赖氨酸、β-氨基异丁酸、β-丙氨酸、肌氨酸、γ-氨基丁酸、组氨酸、α-氨基-n-丁酸。

4种类固醇激素为17羟孕酮、雄烯二酮、睾酮、脱氢表雄酮。氨基酸分析时,每一样本从直径13mm的血斑中选取3个3mm的血斑进行检测,以减少血斑间的差异。而激素分析时,则直接选取直径7mm的血斑进行检测。

此外,研究人员还将部分24小时内采集的EDTA抗凝全血(-4℃保存)制作成DBS和血浆配对样本,用于氨基酸(n=40)或17羟孕酮(n=11)雄烯二酮(n=15)、睾酮(n=12)分析,以期获得DBS和血浆之间各种分析物质的浓度关系,进而根据NCS研究中DBS的浓度换算成相应的血浆参考区间。

研究发现,在新生儿出生后的前四天,有10种氨基酸的分布与性别有关,而与年龄、出生体重、地区无关;4种类固醇激素的浓度分布与年龄和出生体重呈负相关关系,而与地区无关,另外,睾酮的浓度与性别明显相关,男性睾酮明显高于女性。绝大部分研究对象根据DBS中各种氨基酸的分布推算的血浆浓度能够真实地反映其血浆中氨基酸的分布情况,而类固醇激素则不能,当然这可能是由于纳入的研究样本例数不够或抽样误差导致的。

因无法获取足够多的健康对照人群,加之血液样本量有限,建立儿童生长发育过程中血液学标志物的正常参考范围有一定难度。该研究的突出贡献在于,从目前的研究结果来看,研究数据证实了利用大型生物样本库(如NCS研究)中收集的DBS样本,通过一定的换算关系,转换成血浆浓度,制定新生儿参考区间是可行且实用的。如果后续验证结果可靠,对临床来说确是一大福音,护士的采血程序相对轻松简单,家长也易于接受,或许在一定程度上可以减轻医患矛盾和纠纷。

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