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溴化乙锭的净化与应用解析
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溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂,用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。溴化乙锭用标准302nm紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号,可用Polaroid底片或带CCD成像头的凝胶成像处理系统拍摄。

  • 中文名

  • 溴化乙锭

  • 英文名

  • Ethidiumbromide

  • 别称

  • EB

  • 化学式

  • C21H20BrN3

  • 分子量

  • 394.3139g/mol

  • CAS登录号

  • 1239-45-8

  • EINECS登录号

  • 214-984-6

  • 熔点

  • 255-266°C

  • 应用

  • 荧光染色剂[1]

目录
  1. 1概述

  2. 2净化

  1. 3应用

  2. 4副作用

  1. 5注意事项

  2. 6其他特性

溴化乙锭概述

分子式:C21H20BrN3

英文名:Ethidiumbromide

英文别名:Ethidiumbromidesolution;3,8-Diamino-5-ethyl-6-phenylphenanthridiniumbromide~Homidiumbromide;Homidiumbromide;Ethidium?bromide

分子量:394.3139g/mol

熔点:260-262°C

为芳香族荧光化合物

EB(Ethidiumbromide,溴化乙锭)[2]

溴化乙锭净化

由于溴化乙锭具有一定的毒性,实验结束后,应对含EB的溶液进行净化处理再行弃置,以避免污染环境和危害人体健康。

(1)对于EB含量大于0.5mg/ml的溶液,可如下处理:

①将EB溶液用水稀释至浓度低于0.5mg/ml;

②加入一倍体积的0.5mol/LKMnO4,混匀,再加入等量的25mol/L盐酸,混匀,置室温数小时;

③加入一倍体积的2.5mol/LNaOH,混匀并废弃。

(2)EB含量小于0.5mg/ml的溶液可如下处理:

①按1mg/ml的量加入活性炭,不时轻摇混匀,室温放置1小时;

②用滤纸过滤并将活性碳与滤纸密封后丢弃。

*EB=溴化乙锭

溴化乙锭应用

观察琼脂糖凝胶中DNA最常用的方法是利用荧光染料溴化乙锭进行染色,溴化乙锭含有一个可以嵌入DNA堆积碱基之间的一个三环平面基团,它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。在高离子强度的饱和溶液中,大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。当染料分子插入后,其平面基团与螺旋的轴线垂直并通过范德华力与上下碱基相互作用。这个基团的固定位置及其与碱基的密切接近,导致与DNA结合的染料呈现荧光,其荧光产率比游离溶液中染料有所增加。DNA吸收254nm处的紫外辐射并传递给染料,而被结合的染料本身吸收302nm和366nm的光辐射。这两种情况下,被吸收的能量在可见光谱红橙区的590nm处重新发射出来。由于溴化乙锭-DNA复合物的荧光产率比没有结合DNA的染料高出20-30倍,所以当凝胶中含有游离的溴化乙锭(0.5ug/ml)时,可以检测到少至10ng的DNA条带。

由于在该染料存在的情况下,线状DNA的电泳迁移率约降低15%,因此,当需要知道DNA片段的准确大小(如DNA限制酶酶切图谱的鉴定)时,凝胶应该在无EB情况下电泳,电泳结束后用EB染色。染色完毕后,通常不需要脱色。但是在检测小量DNA(小于10ng)片段时,通常要将染色后的凝胶进行脱色。

溴化乙锭可以用来检测单链或双链核酸(DNA或RNA)。但是染料对单链核酸的亲和力相对较小,所以其荧光产率也相对较低。事实上,大多数对单链DNA或RNA染色的荧光是通过染料结合到分子内形成较短的链内螺旋产生的。

溴化乙锭副作用

溴化乙锭可以嵌入碱基分子中,导致错配。许多人认为溴化乙锭是强诱变剂,具有高致癌性。

实际上到2013年6月6日前还不能证明溴化乙锭是基因致癌物。[1]还没有任何证据能证明直接接触EB(溴化乙锭)能对任何动物有毒害性。人们认为EB有致癌性仅仅是因为试管培养细胞时,EB能够抑制细胞生长。

虽然溴化乙锭可以嵌入碱基分子中,导致错配。但是溴化乙锭并不能通过皮肤进入细胞内。所以说溴化乙锭相对其他的致癌物质还是比较安全的。

溴化乙锭注意事项

切勿吸入粉尘。

不慎与眼睛接触后,请立即用大量清水冲洗并征求医生意见。

穿戴适当的防护服、手套和护目镜或面具。

若发生事故或感不适,立即就医(可能的话,出示其标签)。

皮肤接触及吞食有害。

吸入有极高毒性。

刺激眼睛、呼吸系统和皮肤。

可能有不可逆后果的危险。

溴化乙锭其他特性

溴化乙锭专一性抑制线粒体DNA转录[3]

细胞生物学技术
  • 参考资料


    • 1.EB还不确定对人体有害

    • 2.溴化乙锭.搜搜百科[引用日期2013-04-24]

    • 3.王金发.细胞生物学:科学出版社,2003年

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