葡萄糖-6-磷酸脱氢酶荧光斑点试验
实验方法原理 | 在葡萄糖-6-磷酸(GbB)和NADP存在下,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)能使用NADP还原成NADPH,后者在紫外线照射下不会发出荧光。 | ||||||
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实验材料 | G6PNADPHCl 试剂、试剂盒 | 氧化型谷胱甘肽皂素蒸馏水 实验步骤 | 一、实验试剂:混合试剂的成人与配方: 0.1mol/L G6P 1ml 7.5mmol/L NADP 1ml 0.7mol/L tris-HCl(PH7.8)3ml 8mmol/L 氧化型谷胱甘肽 1ml 10g/L皂素2ml 蒸馏水2ml 如混合试剂分装后-20℃保存,可稳定数月 二、实验操作: 1.标本采集:EDTA·Na2H或肝素抗凝全血,若置4℃保存可稳定1周,亦可用肝素化毛细血管从手指或足踉采末梢血液。 2.取12MM×75MM试管3支,患者.正常(对照)和阳性(对照),血各管加入追合试剂200微升. 3.向各管分别加入患者正常和阳性的抗凝全血20微升,混合后置25℃室温中。 4.在反应0/min(混匀后立即吸出)5min和10min时分别从各管吸出反应液1滴,加于新华1号液纸上,使充分干燥. 5.在暗室内,用波长200-340nm的紫外线照射滤纸上的斑点,检查有无荧光. 6.正常人的0min斑点无荧光,5min和10min斑点出现荧光,10min斑点荧光最强,G6PD缺陷患者在0min.5min和10min均无荧光。 三、实验结果:正常人有甚强的荧光,G6PD缺陷患者荧光很弱或无荧光,杂合于或某些G6PD变异体者则可能有轻度到中度荧光. 注意事项 | 1.本法是直接测定;NADPH的量特异性较好. 2.每次或每批要有G6PD正常和缺陷者的标本作对照. |
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发布于 : 2021-08-22
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