染色体CBG标本制备实验一基本方案
| 实验方法原理 | 异染色质在整个分裂间期及分裂期都是浓缩的，因而其大小较为恒定。它们通常位于着丝粒附近，或在染色体臂上呈现“团块”，这些染色质主要由C显带技术呈现，故称为C带。CBG即C带、Ba（OH）2、Giemsa的简写。C带的根本特征是选择性地从染色体臂抽取DNA，但在C带区有很强抗性，仍保留大部分DNA，Giemsa染色后可见效果良好的C带。 抽取DNA的过程由三个连续操作形成。首先，酸处理可使DNA脱嘌呤，但未使DNA骨架断裂；其次热碱处理可使DNA变性，促进继发的DNA溶解；最后，热盐溶液使DNA骨架断开并使碎片溶解进入溶液中。因此，最终以Giemsa染料显示出DNA的不同分布。在优良的C带标本中，常染色质只呈现中期染色体的一般外貌，结构异染色质区着色很深。C带在检查1、9、16特别是Y染色体的异质区时尤为重要。 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 染色体标本 试剂、试剂盒 | HClBa（OH）2SSCGiemsa染色液 仪器、耗材 | 恒温水浴箱染色缸显微镜 实验步骤 | 一、用品和试剂 0.2NHCl，5%Ba（OH）2，2×SSC，Giemsa染色液。恒温水浴箱，染色缸。其余同外周血染色体制备。 二、操作步骤 基本方案 1. 酸处理：常规制作的染色体标本（未染色）置0.2NHCl（室温）处理15-30分钟。水洗。 2. 碱处理：浸入已预温至56℃的5%Ba（OH）2水溶液10分钟。水洗。 3. 热盐处理：置2×SSC溶液（67℃）处理60-90分钟。水洗。 4. 染色：l∶10Giemsa染色液染色10-5分钟。水洗。气干。 5. 镜检。 替代方案： 1. 酸处理：常规制作的染色体标本（未染色）置0.2NHCl（室温）处理60分钟。水洗。 2. 碱处理：浸入1%Ba（OH）2水溶液（50℃）中15-20秒。水洗。 3. 热盐处理：置2×SSC溶液（60℃）90分钟。水洗三次。 4. 染色：l∶10Giemsa染色液染色10分钟。水洗。气干。 5. 镜检。 |
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发布于 ： 2021-08-04
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