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组织染色方法实验一方案2 神经通路学:大鼠的纹状黑质投射实验
来自 : 蚂蚁淘
实验方法原理在本例研究中,仅考察Gerfen的同步双重荧光标记所绘制的纹状黑质通路的空间分布,使用固蓝和联氨黄(diamidinoyellow)的逆行运输.另外,Gerfen还使用了被卵白素-生物素免疫酶技术证实的PHA-L和被放射自显影证实的[3H]脯氨酸和[3H]亮氨酸混合物的顺行运输,用固蓝的逆行荧光追踪与间接免疫荧光技术相结合,证实在纹状体中各种神经肽的存在。这些方法详见Gerfen(1985)。
实验材料
实验步骤

一、染料注射

用1ul的汉密尔顿注射器将固蓝和联氨黄各30nl注射入同侧黑质的不同位点(固蓝染细胞浆,联氨黄逆行标记神经元的核,存活时间为22h,以限制联氨黄弥散入神经元胞质或周围的胶质细胞)。

二、麻醉和固定

三、切片和显微镜

四、结果

在同侧黑质不同的位点双标显示纹状黑质投射的局部解剖图,纹状体吻尾侧和内外侧的空间分布成分被转换到黑质的内外侧分布(图15-3)。然而,图中的成分是近似或界限不清的,因为相对分开的注射点导致纹状体染色细胞有重叠区域(图15-3B,B’)。

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