阴离子位点显示实验一聚乙烯亚胺染色法
| 实验方法原理 | |||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 组织样品 试剂、试剂盒 | 聚乙烯亚胺二甲胂酸钠缓冲液戊二醛锇酸 实验步骤 | 1.用0.1mol/L二甲胂酸钠缓冲液配1％聚乙烯亚胺，含2％蔗糖。 2.组织切成小块，浸泡在聚乙烯亚胺溶液中，室温下反应30min。 3.0.1mol/L二甲胂酸钠缓冲液充分漂洗。 4.3％戊二醛固定，漂洗。 5.1％锇酸后固定，包埋，超薄切片，染色同常规。 注意事项 | 1.一般情况下，细胞或组织先与阳离子化铁蛋白或聚乙烯亚胺反应，然后固定，这样较易取得阳性结果。也有人先进行固定，再进行反应，这样细胞结构保存较好，不过固定的条件需摸索好，否则不易取得阳性结果。另外，用阳离子化铁蛋白染色时，阳离子化铁蛋白的浓度、染色时间等，不同的细胞并不完全相同，要取得较好的结果，也需要摸索。 2.用聚乙烯亚胺染血管内皮细胞基膜（如肾小球内皮细胞基膜）阴离子位点时，有人在动物实验时，从血管注射给予聚乙烯亚胺，30min后取材，进行常规固定处理，效果较好。不过聚乙烯亚胺有毒性，对内皮细胞损伤严重，注射过多会导致动物死亡，一般大鼠可注射1％聚乙烯亚胺0.2ml。 3.心肌细胞用聚乙烯亚胺显示阴离子位点时，有人注意到心肌细胞膜及心肌细胞膜外的基膜上都可有阴离子位点存在，但二者的分布情况不同。另外并非所有的细胞膜或基膜都可用聚乙烯亚胺显示阴离子位点存在。 其他 | |
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发布于 ： 2018-08-05
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