免疫组织化染色
| 实验材料 | 新鲜组织 试剂、试剂盒 | 二甲苯酒精H2O2抗原修复液枸橼酸钠缓冲液石蜡福尔马林PBSDAB苏木素树胶丙酮打孔液柠檬酸钠APES 仪器、耗材 | 恒温摇床高压锅塑料切片架耐温玻璃容器-80℃冰箱恒冷冰冻切片机载玻片 实验步骤 | 一．石蜡切片免疫组化染色实验步骤： 1．石蜡切片脱蜡至水：（石蜡切片染色前应置60℃1小时）。 （1）二甲苯I、II,各10分钟。 （2）梯度酒精：100%，2分钟®95%，2分钟®80%，2分钟®70%2分钟。 （3）蒸馏水洗：5分钟，2次（置于摇床）。 2．过氧化氢封闭内源性过氧化物酶：3%H2O2，室温10分钟（避光）。 3．蒸馏水洗：5分钟，2次（置于摇床）。 4．抗原修复： 根据待检测的抗原，选择适当的方法。 附：抗原修复液（10mMpH6.0枸橼酸钠缓冲液）的配制 （1）储备液的配制： A液：枸橼酸三钠-2H2O29.41g+蒸馏水1000ml B液：枸橼酸21g+蒸馏水1000ml （2）工作液的配制：A液82ml+B液18ml+蒸馏水900ml 抗原修复的方法： （1）高压锅处理技术：枸橼酸钠缓冲液（10mM，PH6.0）,淹没切片,盖上锅盖，高压锅内煮沸,上汽3分钟后缓慢冷却（可用自来水在高压锅外冲，以助冷却）。 （2）微波处理技术:用塑料切片架,置于塑料或耐温玻璃容器内，枸橼酸钠缓冲液淹没切片，选择中高或高档,5分钟;取出并补充已预热的枸橼酸钠缓冲液；再选择中高或高档,5分钟（.最佳温度为92～95℃） （3）酶消化处理：此略。 抗原修复的注意事项： （1）组织不能干。 （2）选择抗原修复方法要因抗体而异。 （3）该方法主要用于10%福尔马林固定、石蜡包埋组织。 （4）抗原修复后至DAB显色的过程中，均需用PBS缓冲液。 5．PBS：5分钟，2次（置于摇床）。 |
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发布于 ： 2018-08-10
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