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免疫酶染色试验一细胞免疫酶染色法(以检测血清中 EB 病毒 IgA 抗体为例说明)
来自 : 蚂蚁淘
实验方法原理

免疫酶染色试验(immunoenzymaticstainingtest,IEST)是用酶(如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)标记已知抗体抗原,与相应抗原或抗体结合,形成酶标记抗体-抗原复合物,复合物中的酶在遇到相应的底物时,能催化底物产生颜色反应,根据有色产物的有无及其浓度,即可间接推测被检抗原或抗体是否存在及其含量,从而达到定性或定量的目的。

实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤

(1)首先将保存的EB病毒细胞抗原片,移于室温,吹干。


(2)每孔内滴加0.01mol/LPBS(pH7.4)稀释的待检血清(每个标本加1孔),同时分别加1:10稀释的EB病毒VCAIgA抗体阳性和阴性血清各2孔做为对照,移入湿盒中置37℃温育30min后,用PBS液洗3次,每次5min。


(3)每孔内滴入用PBS液作适当稀释的HRP标记的马抗人IgA抗体,放入湿盒后,置37℃温育30min,再用PBS液洗3次,每次5min。


(4)将细胞片浸入酶底物内约4min,在反应结束后,用蒸馏水漂洗1次,吹干并镜检。


3.结果判断在普通光学显微镜下阳性细胞为棕褐色,阴性细胞白色透明不显色。

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注意事项
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其他
IgA抗体:使用时用0.01mol/LpH7.4PBS作适当稀释,酶底物溶液:称取33"-二氨基联苯胺50mg溶于0.05mol/LTris-HCl缓冲液(pH7.6)100ml加3%H2O20.1ml
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