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台盼蓝(trypan blue)排斥实验一台盼蓝排斥法
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台盼蓝

trypanblue

排斥实验

一、

目的

学习台盼蓝排斥实验的原理和方法

二、

概述

台盼蓝又称锥蓝,是一种阴离子型染料,这种染料不能透过活细胞正常完整的

细胞膜,故活细胞不着色,但死亡细胞的细胞膜通透性增加,可使染料通过细胞膜进

入细胞内,使死细胞着色呈蓝色。是最常用的检测细胞活率的方法。

细胞活力常用

百分比表示,活力的大小对试验结果有很大影响。细胞活力的测定有许多方法,最简

便常用的方法是台盼蓝(

trypan

blue

)染色法。

三、材料

1.

显微镜、玻片、盖玻

片、滴管

2.

试剂:

0.4%

台盼蓝染液:

1)

台盼蓝(

Trypanblue

0.4g2)

生理盐

100ml

四、操作步骤

1

、将待染色细胞稀释至所需浓度。

(方法及浓度范围与细

胞计数相同)

2

0.1ml

细胞悬夜约加新鲜配置的染液一小滴,

室温下染

3

5min

3

染色过的细胞材料,

取一滴细胞悬液置玻片上,

加盖玻片后放在高倍镜下观察。

4

死亡的细胞着浅蓝色并膨大,无光泽;活细胞不着色并保持正常形态,有光泽。计数

100

200

个白细胞。

统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活力。

细胞活力(

%

=

未染色的细胞数

/

观察的细胞总数

×

100

五、注意事项

1.

染色时间不能太长,否

则活细胞也会逐渐积累染料而染成颜色,使检测结果偏低。

2.

另可结合细胞计数方

法,同时进行细胞计数和活力检测。

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