台盼蓝
(
trypanblue
)
排斥实验
一、
目的
学习台盼蓝排斥实验的原理和方法
二、
概述
台盼蓝又称锥蓝,是一种阴离子型染料,这种染料不能透过活细胞正常完整的
细胞膜,故活细胞不着色,但死亡细胞的细胞膜通透性增加,可使染料通过细胞膜进
入细胞内,使死细胞着色呈蓝色。是最常用的检测细胞活率的方法。
细胞活力常用
百分比表示,活力的大小对试验结果有很大影响。细胞活力的测定有许多方法,最简
便常用的方法是台盼蓝(
trypan
blue
)染色法。
三、材料
1.
显微镜、玻片、盖玻
片、滴管
2.
试剂:
0.4%
台盼蓝染液:
1)
台盼蓝(
Trypanblue
)
0.4g2)
生理盐
水
100ml
四、操作步骤
1
、将待染色细胞稀释至所需浓度。
(方法及浓度范围与细
胞计数相同)
2
、
每
0.1ml
细胞悬夜约加新鲜配置的染液一小滴,
室温下染
3
~
5min
。
3
、
染色过的细胞材料,
取一滴细胞悬液置玻片上,
加盖玻片后放在高倍镜下观察。
4
、
死亡的细胞着浅蓝色并膨大,无光泽;活细胞不着色并保持正常形态,有光泽。计数
100
~
200
个白细胞。
统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活力。
细胞活力(
%
)
=
未染色的细胞数
/
观察的细胞总数
×
100
五、注意事项
1.
染色时间不能太长,否
则活细胞也会逐渐积累染料而染成颜色,使检测结果偏低。
2.
另可结合细胞计数方
法,同时进行细胞计数和活力检测。