植物总RNA的提取实验一研磨法
| 实验方法原理 | 在液氮中研磨植物材料,使部分细胞破碎,进一步使植物细胞在裂解液中裂解,用醋酸钠和氯仿沉淀蛋白质,异丙醇沉淀核酸,溶解后经氯化锂沉淀总RNA,洗涤后得到高质量的RNA。本实验旨在了解和掌握植物总RNA的分离和纯化方法。 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 植物RNA 试剂、试剂盒 | 尿素Tris-HClNa2EDTANaClTris饱和酚SDSLDS醋酸钠氯仿-异戊醇异丙醇TE缓冲液LiCl乙醇 仪器、耗材 | 研钵烧杯离心机 实验步骤 | 取5～10g材料放入研钵中,加入过量液氮,迅速研磨成均匀的粉末(在研磨过程中,保证材料始终浸在液氮中,研磨约30min)。 待液氮自然挥发干净后,将材料转入100ml的离心管中,加入6～8倍体积的裂解液1,轻轻搅拌后,0℃冰浴20min。12000r/min,4℃离心15min。 取上清,加入1/3体积的3mol/L醋酸钠,1/5的氯仿异戊醇,轻轻摇匀,0℃冰浴20min。 2000r/min,4℃离心15 min(加5倍体积裂解液2溶解沉淀以提取DNA)。 取上清,加入等体积冰浴冷却的异丙醇,混匀且冰浴10min。 5000r/min,4℃离心10min,将沉淀溶于5ml含有0.1%SDS的TE缓冲液中,加入8mol/LLiCl使终浓度至2.5mol/L,冰浴3h或4℃过夜。 12000r/min,4℃离心10min。 70%乙醇洗涤沉淀两次,空气干燥10min,溶于无菌水(DEPC焦碳酸二乙酯,处理),加入1/10体积10%的SDS,重复第4～6步骤,进一步除去蛋白质,70%乙醇20℃长期保存。 |
免责声明 本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容。
版权声明 未经蚂蚁淘授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
发布于 ： 2018-08-10
阅读（155）
▍
相关分类
▍
相关文章
lijun_12的主页 主页
Alomone Labs 抗体 | 总结
弓形虫IgM抗体测定试剂盒使用说明书(酶联免疫捕获法)
【pipette】什么意思_英语pipette的翻译_音标_读音_用法 ...
共聚焦培养皿型号,共聚焦培养皿报价上海点睿仪器仪表有限公司
德国艾本德移液器价目表性能参数,报价/价格,图片
【求助】ELISA检测抗原包被液如何选择? 免疫学讨论版
Transient transfection into 293T cells 氨基酸和蛋白实验 生物在...
鱼类皮质醇(Cortisol)ELISA Kit | 上海依赫生物科技有限公司
化肥出口急刹车 产业链条骤然绷紧_产经动态_新浪财经_新浪网
一氧化二氢恶作剧_
首页 江门市公共资源交易网
