杂交瘤细胞（hybridoma）是一种在制备单克隆抗体过程中，用骨髓瘤细胞和B细胞融合而成的细胞的生物技术。杂交瘤细胞一般通过瘤细胞培养来制备。

杂交瘤技术是指两个或两个以上细胞合并形成一个细胞的现象，它可使两个不同来源的细胞核在同一细胞中表达功能。

首先来看下我们需要筛选的目的细胞，即B细胞和瘤细胞的融合细胞，但在细胞融合的过程中除了B细胞与瘤细胞能融合外，B细胞自身、瘤细胞自身也都能发生融合，另外还有多个B细胞与多个瘤细胞融合的情况（这种细胞不稳定，几乎不能存活)以及未融合的细胞。B细胞和B细胞的自身融合细胞，其仍然不能无限增殖，在体外增殖数代后就会死亡，不足为虑，主要的问题是如何消灭未融合和自身融合的瘤细胞。

核酸合成主要途径

先看嘌呤核苷酸的合成，生物体内先由5-磷酸核糖焦磷酸合成次黄嘌呤核苷酸，次黄嘌呤核苷酸合成后，经氨基化即可形成腺嘌呤核苷酸；经氧化和氨基化即可形成鸟嘌呤核苷酸。再来看嘧啶核苷酸的合成，生物体内先先由氨甲酰磷酸和天冬氨酸合成尿嘧啶核苷酸，然后尿嘧啶核苷酸经磷酸化、氨基化就可形成胞嘧啶核苷三磷酸；在核糖核酸还原酶的还原作用下可形成尿嘧啶脱氧核糖核苷酸，再经过甲基化后可形成胸腺嘧啶核苷酸。这就是体内核酸合成的主要途径。

核酸合成旁路途径 

当体内核酸合成主要途径发生意外情况时，还有一条补救的旁路途径来弥补，就是次黄嘌呤和5-磷酸核糖焦磷酸在磷酸核糖转移酶（HGPRT）的作用下可以直接合成次黄嘌呤核苷酸，然后再由次黄嘌呤核苷酸合成鸟嘌呤核苷酸和腺嘌呤核苷酸。

如何筛选呢？

体内有两条核酸合成途径，那么就可以利用其中一条来进行筛选了，看图：

8-氮鸟嘌呤筛选原理

科学先驱们是这样解决的：首先用8-氮鸟嘌呤（一种嘌呤类似物）来对瘤细胞进行筛选，它可以参与核酸合成的旁路途径，但是由此合成出来的核酸不能具备正常核酸那样的功能，因此这种细胞就都会死去，能存活下来的细胞都是不能进行旁路合成核酸，该过程的本质就是为了筛选出HGPRT缺陷型细胞株。这种缺陷型的瘤细胞与B细胞进行融合，融合后的细胞则既能通过主要途径合成核酸，也能通过旁路合成，而未融合瘤细胞和瘤细胞自身融合细胞仍然只能通过主要途径合成核酸。 

HAT选择培养基筛选原理

在选择培养基中添加某些物质来阻断核酸的主要途径，那么未融合的瘤细胞和瘤细胞自身融合的细胞在筛选过程中就会死去，能存活下来的就只有能进行旁路途径合成核酸的B细胞和瘤细胞的融合细胞了。A—氨基蝶呤为叶酸的结构类似物，正是它阻断了核酸合成的主要途径，阻碍了次黄嘌呤核苷酸和胸腺嘧啶核苷酸的合成。H—次黄嘌呤，可经核酸合成旁路途径合成次黄嘌呤核苷酸，从而完成嘌呤核苷酸的补救合成。T—胸腺嘧啶核苷酸，直接添加到培养基中来补足被阻断的嘧啶核苷酸的合成。

下面来谈谈杂交瘤技术制备单克隆抗体的主要步骤：

 （1）抗原制备； 
　　（2）免疫动物； 
　　（3）免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备；  
　　（4）细胞融合；  
　　（5）杂交瘤细胞的选择培养； 
　　（6）杂交瘤细胞的筛选； 
　　（7）杂交瘤细胞的克隆化； 
　　（8）单克隆抗体的检定； 
　　（9）分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立；  
　　（10）单克隆抗体的大量制备。

下面简要介绍单克隆抗体的制备过程：

 1、免疫动物免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。  
　　2、细胞融合采用眼球摘除放血法处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。  
　　3、选择性培养选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中，未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，不能利用补救途径合成DNA而死亡。未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能在HAT培养基中存活和增殖。 
　　4、杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。 
　　5、单克隆抗体的大量制备单克隆抗体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培养法。  
　　（1）体内诱生法取Balb/c小鼠，首先腹腔注射0.5ml液体石腊或降植烷进行预处理。1-2周后，腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖，并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周，可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可获得大量单克隆抗体。  
　　（2）体外培养法将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中，杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体，收集培养上清液，离心去除细胞及其碎片，即可获得所需要的单克隆抗体。但这种方法产生的抗体量有限。近年来，各种新型培养技术和装置不断出现，大大提高了抗体的生产量。