病毒RNA提取实验一TE饱和酚/氯仿提取法
| 实验方法原理 | 大多植物病毒RNA为单链RNA，并且其极性与mRNA极性相同，植物病毒RNA提取较为简单，一般使用酚氯仿即可获得满意结果。 | ||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | TMV病毒液 试剂、试剂盒 | TE-饱和酚:氯仿氯仿NaAc乙醇TE缓冲液双菌水 仪器、耗材 | 冷冻台式离心机低温真空干燥仪电泳仪电泳槽 实验步骤 | 一、实验材料准备 1. 材料 提纯TMV病毒液（10mg/ml）。 2. 设备 冷冻台式离心机，低温真空干燥仪，电泳仪，电泳槽。 3. 试剂 TE-饱和酚:氯仿（1:1），氯仿，3MNaAc(pH5.2)，乙醇(100%和70%)，TE缓冲液，无RNA酶的双菌水。 二、操作步骤 1. 取一Eppendorf管加入提纯TMV（10mg/ml)400ml，再加入等体积酚/氯仿，盖紧管盖后用手充分振荡1分钟，4℃下12000g离心10分钟。 2. 吸取水相于一新eppendorf管，再用酚/氯仿抽提，直至水相和有机相交界面无蛋白为止。 3. 吸取水相于新eppendorf心管，加入等体积氯仿，用手倒置离心管数十秒，4℃下12000g离心10分钟。 4. 取水相，加入1/10倍体积的3mol/LNaAc(pH5.2)，2.5倍体积的冰冷乙醇，混匀，-20℃30分钟。 5. 4℃下12000g离心15分钟，小心弃去上清液，用70%乙醇洗涤沉淀，4℃下12000g离心5分钟。 6. 小心弃去上清液，沉淀真空干燥5分钟或空气干燥10分钟，并溶于无RNA酶的双菌水或TE缓冲液中。 7. 取10ml进行电泳分析。 注意事项 | 1. 整个操作应尽可能在低温下进行。 2. 由于病毒RNA镶嵌于外壳蛋白里面，因此要充分剥去病毒外壳蛋白，一般需要多次进行酚/氯仿的抽提。 |
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发布于 ： 2018-07-19
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