免疫球蛋白标记技术一125I标记单克隆抗体技术
实验方法原理 | 氯胺桾即对甲苯碘氯胺钠,在水溶液中生成次氯酸,为一种温和氧化剂,当加入到有蛋白质和碘的弱碱水溶液中,可将I2氧化为I+并结合到氨基酸上。如标记条件温和,标记后的McAb仍具有良好的结合活性,通过放射性同位素强度的测定可反映相应抗原的含量。 | ||||||||
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实验材料 | McAb125I 试剂、试剂盒 | 磷酸缓冲液氯胺桾偏重亚硫酸钠KIBSA 仪器、耗材 | 超净台γ计数仪PD10柱
实验步骤 | 1. 在细胞冻存管内加入纯化的McAb100μg/100μl,再加入10μl0.05M磷酸缓冲液,再加入10μl(含1mCi)125I 2. 加入10μl氯胺-T(5mg/ml溶于0.05M磷酸盐缓冲液),孵育时间不超过30秒 3. 加入100μl偏重亚硫酸钠(1.2mg/ml溶于0.05M磷酸缓冲液) 5. 用PD10柱(SephadexG25)除去游离125I。用4%BSA、PBS洗脱 结合于McAb125I放射性强度(cpm) 标记率(%)=─────────────────── 总放射性强度(cpm) 结合于某一管McAb上的放射性强度 比活性(μCi/μgMcAb)=──────────────── 某一管McAb总量 注意事项 | 免责声明 本文仅代表作者个人观点,与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实,对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺,请读者仅作参考,并请自行核实相关内容。
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发布于 : 2021-07-20
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