抗血清中去除交叉反应性抗体实验
| 试剂、试剂盒 | 封闭缓冲液封闭液细胞悬浮缓冲液抗体LB培养基 仪器、耗材 | SorvalGSA转子或相当转子适用于处理细菌的超声波破碎仪大肠杆菌Y1090hsdR 实验步骤 | 材料 缓冲液和溶液 贮存缓冲液和试剂的组分请见时录12。 将贮存液稀释到适当的浓度。 封闭缓冲液 10mmol/LTris-Cl(pH8.0) 150mmol/LNaCl 0.05%(V/V)Tween-20 封闭液（1%m/V明胶,3%m/V牛血清白蛋白，或5%m/V脱脂奶粉） 这些封闭试剂的优点，不同实验室备执一词。我们建议使用者进行预试验确定哪种封闭液与所选择的第一抗体和第二抗体匹配最优。封闭液可以贮存于4°C，重复使用数次。加人终浓度为0.05%(m/V）的叠氮化钠用以抑制微生物的生长。 细胞悬浮缓冲液 50mmol/LTris-Cl(pH8.0) 10mmol/LEDTA(pH8.0) 过滤除菌，以50ml等分后贮存于4°C。 抗体 制备用于文库筛选的抗体 培养基 LB培养基 离心机和转子 SorvalGSA转子或相当转子 专用设备 适用于处理细菌的超声波破碎仪 载体和菌株 大肠杆菌Y1090hsdR 该菌株可以从Stratagene,LifeTechnologies或ATCC(www，atcc.org)获得。 方法 1.在LB培养基中培养100ml大肠杆菌Y1090hsdR株达到饱和。 2.于4°C以5000g离心10min收获细菌。 3.细菌重悬于3ml细菌悬浮缓冲液中。反复冻融数次，再于0°C用最大功率超声波处理6次，每次20s。 4.提取液于4°C以12000g离心10min,将上清液转移到另一试管内，所得裂解液贮存于-20°C。 5.使用裂解液前先用封闭液以1:10稀释用于筛选的抗体制剂。 6.每毫升抗血清中加入0.5ml大肠杆菌裂解液。置室温缓慢摇动温育4h。处理后的抗体加入0.05%叠氮化钠，保存于4°C以备免疫筛选时使用。 |
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发布于 ： 2021-07-29
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