1. 准备下列器械并消毒（高压灭菌，或者可能的话一次性使用）：
大剪刀（两把）
刮刀（两或三把）
胰蛋白酶消化的烧瓶（每 30 g 绞碎样品一个）
带接液器的 250-μM 钢筛网
15-ml 和 50-ml 离心管
2. 分离组织样品。所有操作在层流柜中进行。
(1) 从腹整形样品分离
① 解剖样品，去除任何皮肤、筋膜、肌肉等，只保留脂肪组织。称重样品，每 10 g 分装一份。
② 在无菌盘上，用剪刀将样品剪碎。
③ 用 60 ml 注射器（不带针头）吹吸样品，反复3次或至样品充分液化。
④ 取 20 ml 组织放入装有 20 ml PBS 的 50 ml 离心管，混匀，700 r/min 离心 5 分钟吸出含血水相，重复操作，直至样品相对无血。
(2) 从吸脂样品分离
① 置真空包装样品于筛网上，用含 0.5 μg/ml 两性霉素和 200 IU/ml 庆大霉素，200 μg/ml 链霉素的 PBS 反复冲洗。冲洗过程中用刮刀在被冲洗物周围搅动，辅助冲洗。
② 取 20 ml 组织放入装有 20 ml PBS 的 50 ml 离心管，混匀，700 r/min 离心 5 分钟。吸掉含血水相。
3. PBS 溶解 BSA 至终浓度 4.0 mg/ml（PBS/BSA）；过滤除菌。配制胶原酶溶液，PBS/BSA 溶解胶原酶和 DNA 酶，终浓度分别为 4.0 mg/ml 和 0.02 mg/ml，0.2 μM 滤膜过滤除菌。
10 ml 溶液大约可以处理 10 ml 脂肪样品。
4. 用无菌刮刀把步骤2中剪碎的脂肪组织刮到胰蛋白酶消化的烧瓶中，然后加入胶原酶，每毫升组织加 1 ml。
5. 37℃ 80 r/min 旋动保温 30 分钟。
6. 消化的同时，用 PBS 稀释 PBS/BSA（4.0 mg/ml BSA）至 BSA 终浓度 0.2 mg/ml。
7. 消化样品倒入 50 ml 离心管（每管约 20 ml）。
8. 吊筒式医用台式离心机室温 1500 r/min 离心 5 分钟。
9. 液态脂和水相倒入另一 50 ml 离心管。由于细胞沉淀极易被倒掉，最好使用无菌离心管。
10. 细胞重悬于 5 ml PBS（0.2 mg/ml BSA），1500 r/min 离心 5 分钟，倒掉上清。沉淀悬于 1 ml 含 5% FCS 的 PBS（PBS/FCS）中。
1. 短暂振荡，使磁珠溶液均一。
2. 用 PBS 稀释 PBS/BSA（4.0 mg/ml BSA）至 BSA 终浓度 0.2 mg/ml。
3. 取 100 μl 磁珠（1 mg）加 2 ml 含 0.2 mg/ml BSA 的 PBS（20 倍稀释磁珠混合物）。混匀，用钴-钐磁体分离样品。
4. 弃上清，沉淀悬于 100 μl PBS（含 BSA 0.2 mg/ml）。
5. 磁珠偶联抗 PECAM 抗体。
抗人 CD-31（PECAM）单克隆抗体
6. 用磁体从上清中分离磁珠，弃上清。每毫克磁珠加 3 ml PBS/BSA（0.2 mg/ml BSA），混匀，用磁珠分离。
7. 重复步骤6一次。
8. 磁珠悬于 100 μl PBS/BSA（0.2 mg/ml BSA），4℃ 可贮存数周。
1. 向“分离样品的制备”步骤10的细胞样品中加入 30 μl 偶联了抗 PECAM 抗体的磁珠。
2. 细胞和磁珠混合物冰上保温 15 分钟。
3. 磁体置于管侧 5 分钟，吸引筛选样品向磁体移动。小心吸弃上清，移开磁体。
4. 向磁珠中加 2 ml PBS/FCS，轻轻混匀，确保没有大的团块。用磁体重复筛选。
5. 重复步骤3和4三次。
6. 磁粒悬于 1 ml 接种培养基中。
7. 重悬细胞接种明胶包被的 T25 板，每 10 g 脂肪组织分离的细胞接种一块 T25 板。37℃ 振动培养。
8. 细胞长至足够密度时传代，在最初的两次传代中要应用筛选程序，确保内皮细胞纯度。
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