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免疫酶标技术一PAP法(过氧化物酶抗过氧化物酶抗体复合物法)
来自 : 蚂蚁淘
实验方法原理PAP的基本原量是在间接法的基础上,即在加完酶标二抗以后,再加一个PAP复合物(过氧化物酶一抗过氧化物酶抗体复合物)。PAP复合物为由3个酶分子和2个抗酶抗体亚单位构成的复环形复合物,其稳定性很强,冲洗时不会脱落。在这种方法中,PAP复合物中的抗酶抗体与特异性一抗必须来自同一种属动物。其优点是比间接法更为灵敏,而且背景染色体。
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
1. 标本固定后,PBS洗涤;

2. 1%H2O2(或1%H2O2甲醇)阻断内源性过氧化物,室温10~20分钟;

3. PBS洗2×3分钟;

4. 正常血清(二抗的正常血清)孵育,室温20分钟;

5. 滴加一抗,室温1小时或4℃过夜;

6. PBS洗3×3分钟;

7. 滴加二抗,室温30分钟;

8. PBS洗3×3分钟;

9. 加PAP复合物,室温60分钟;

10. PBS洗涤3×3分钟;

11. 0.04%DAB+0.03%H2O2显色5~10分钟;

12. 充分水洗;

13. 苏木精复染,封片观察。
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