Target | GBE1 |
Reactivity | Human,Mouse |
Host | Rabbit |
Clonality | Polyclonal |
TestedApplications | WB,IF/ICC |
Recommendeddilutions | WB:1/1000-1/2000,IF/ICC:1/20-1/50.Optimaldilutions/concentrationsshouldbedeterminedbytheenduser. |
Immunogen | RecombinantproteinofhumanGBE1. |
Purification | Affinitypurified. |
Form | Liquid |
Isotype | IgG |
Conjugation | Unconjugated |
Storage | Aliquotandstoreat2°Cto8°Cuponreceipt. |
MolecularWeight | CalculatedMW:80kDaObservedMW:80kDa |
SwissProt | Q04446 |
GeneID | 2632 |
GeneSymbol | GBE1 |
Concentration | >1mg/ml |
Buffer | PBS,pH7.3,0.02%sodiumazide. |
UNSPSCCode | 12352203 |
AvailABIlity | Shippedwithin5-10workingdays. |
Note | Thisproductisforresearchuseonly. |
Abbexa是一家致力于为生命科学研究、药物研发及生物技术公司提供优质抗体、蛋白及检测试剂盒等产品的高科技生物技术公司。基于剑桥大学研发技术优势,Abbexa提供包括一抗、二抗、纯化蛋白、ELISA试剂盒、各种酶类及其它多种试剂与研究工具的大量生命科学研究产品。
目前Abbexa的产品涵盖单克隆抗体、多克隆抗体、纯化蛋白质及生物试剂,此外,为满足研发人员特殊的实验需要,Abbexa还提供抗体/多肽定制服务。严格的质控标准保证了Abbex产品的高性能,如您对产品不满意,Abbexa将直接提供退/换货服务
CLIAKits 化学发光免疫分析(chemiluminescenceimmunoassay,CLIA) RNAInterferenceProducts RNA干扰试剂 RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。基因沉默,主要有转录前水平的基因沉默(TGS)和转录后水平的基因沉默(PTGS)两类:TGS是指由于DNA修饰或染色体异染色质化等原因使基因不能正常转录;PTGS是启动了细胞质内靶mRNA序列特异性的降解机制。有时转基因会同时导致TGS和PTGS。 由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达,(长度超过三十的dsRNA会引起干扰素毒性)所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的治疗领域。 1. RNAi抑制转座子活性 两方面的证据提示转座子活性的抑制与siRNA有关 ①发现蠕虫mut-7基因参与RNAi并且与转座子的转座抑制有关; ②在果蝇中,参与RNAi的RNA解螺旋酶Spindle-E的突变将导致该基因引起的基因沉默的缺失,同时提高了反转录转座子活性。 2. RNAi抵御病毒感染 在拟南芥中研究转基因引起基因沉默时发现,sgs2/sde1基因突变的拟南芥对病毒的侵染表现出高度的敏感性。 3. RNAi参与异染色质的形成和维持 Hall等研究表明,着丝粒同源重复序列和RNAi组分一起正负调节着异染色质的形成并共同促使异染色质组装成核;Vople等在敲除裂殖酵母(S.pombe)的RNAi途径基因(如Argonaute、Dicer、RDRP)时发现异染色质转录得到的dsRNA可以在RNAi途径的参与下,加工成siRNA,siRNA募集异染色质蛋白1(HP1),然后靶向性引起相应异染色质区域的转基因沉默。 4. RNAi参与机体的发育调控及生理代谢 RNAi只抑制转录后的基因,所以RNAi在生物体发育学研究中具有优势。Chuang等用RNAi技术进一步证实了AG、CLV3、AP1、PAN等已知功能基因在拟南芥花发育过程中的功能。在RNAi过程中形成的RISC复合物可根据不同情况分别利用siRNA或stRNA行使不同的功能,但最终均导致特定基因沉默。 IsotypeControl 同型对照 同型对照(IsotypeControl),使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白,用于消除由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生的背景染色。 同型对照 同型对照的主要目的是确定一抗的结合是特异性的,而不是非特异性的Fc受体或与其他蛋白的相互作用。还可以用来竞争性的结合抗体,与功能阻断抗体发挥同样的功能。 同型对照要与一抗的来源,Ig分型和标记完全一致。 如果一抗是多抗,可以用annormalserum(与一抗相同的正常血清)(mustbethesamespeciesasprimaryantibody)。Thiscontroliseasytoachieveandcanbeusedroutinelyinimmunohistochemicalstaining.这个可以咨询试剂商。同型对照为免疫荧光标记中的阴性对照。由于荧光标记单抗的组来源不同,应选用相同来源的未标记单抗作为同型对照来调整背景染色。举个例子:比如检测一抗为单抗的mouseantiratCD11b,cloneOX-42purifiedIgG,那么它的isotype是mouseIgG2a,所以可以用purified(纯化的)mouseIgG2a来做OX-42的同型对照(IsotypeControl)。一般的的生物技术公司和国内的代理都有出售。 同型对照:是指与MoAb相同的、未免疫小鼠的免疫球蛋白亚类,若使用直接免疫荧光染色法,同型对照也应标记荧光色素,如IgG1FITC、IgG2a、PE等。主要考虑了细胞的自发荧光、FC受体介导的抗体结合和非特异性抗体结合等影响因素。此外,同型对照与MoAb所标记的荧光色素、浓度、F:P比值(标记的荧光色素与免疫球蛋白分子的比值)应该相同为最佳,这对准确设定阴性与阳性细胞的界标有重要意义,切忌使用与MoAb不相匹配的同型对照,最好为同一实验室、采用相同工艺或方法制备(如同一品牌)的产品。
ebiomall.com
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
1取组织
(1) 灌注固定:暴露心脏,将注射针头插入左心室,剪开右心耳,快速灌注PBS,待右心耳处流出澄清液体,换4%多聚甲醛灌注到大鼠四肢强直为止,快速取脑和肾。
(2) 固定:将组织置于4%多聚甲醛中固定15小时
(3) 脱水:将组织放入30% 蔗糖溶液中直至下沉
(4) 切片:脑组织冰冻切片20微米,37度烘干2h以上;
(5)将切片放置-80度保存,随用随取。
2免疫单标记
(1)做抗原修复(0.4g柠檬酸、3g柠檬酸钠、1000ml水配制成溶液,放到水浴箱中90~94℃保存15min),冷却后, 用1*PBS反复洗标本10min,吸去PBS,同时向标本加渗透液(配0.4%trition液,然后将BSA加入到配好的trition液中,配成1%浓度)100ul,常温下湿盒反应1h。
(2) 吸去渗透液,同时向标本加block液(5%封闭用正常山羊血清)100ul,常温下湿盒反应5h。
(3) 吸去block液,同时向标本加入1:50稀释的羊抗鼠一抗100ul,37度湿盒反应过夜。
(4)吸去一抗,并回收,用1*PBS洗液反复洗15min。
(5)快速从冰箱中取出驴抗羊的二抗,并立即用锡纸包裹,注入到一个新的以锡纸包裹的tube管中并用PBS以1:200稀释。
(6)进入暗室,吸去PBS,同时加入二抗100ul,37度湿盒反应2h,封片。
(7)放置到荧光显微镜下观察。
没有marker,怎么知道你做的蛋白大小?
没有参照物,怎么知道你跑的快不快?
没有尺子,怎么知道你的size大小?
凭嘴说吗?
单克隆抗体结构相似且均一,有高度特异性
多抗,稀释度更大,特异性相对较差,容易出现多条带。
兔的单克隆抗体和鼠的单克隆抗体在使用上不会有什么区别。
用来很多抗体,许多时候觉得单抗多抗也未必是理论上那样的。单抗做不好的也有,多抗条带唯一且清晰的也有。
而且很多蛋白的抗体未必有那么多的选择。
羊多抗免疫步骤和兔多抗免疫步骤一样的,周期也是一样的,就是免疫的部位不同,羊的免疫部位是:羊的小腿内侧皮下。采血部位是:颈静脉;放血部位是:颈静脉;最后收集血的部位:颈动脉。希望对你有帮助。
一般来说多克隆的阳性率高一些,但出现假阳性的比例也高一些。
1、制备抗原。
2、选择实验动物。
3、动物免疫。
4、试取血进行测试,看看是否成功免疫。
5、如果成功免疫,杀死实验动物,采集全部血清。
6、纯化出抗体。
7、鉴定抗体。包括纯度以及特异性。
二、抗体分类
抗原通常是由多个抗原决定簇组成的,由一种抗原决定簇刺激机体,由一个B淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体称之为单克隆抗体(Monoclone antibody)。由多种抗原决定簇刺激机体,相应地就产生各种各样的单克隆抗体,这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体,机体内所产生的抗体就是多克隆抗体;除了抗原决定簇的多样性以外,同样一类抗原决定簇,也可刺激机体产生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五类抗体。多克隆抗体是由异源抗原(大分子抗原、半抗原偶联物)刺激机体产生免疫反应,有机体浆细胞分泌的一组免疫球蛋白。多克隆抗体由于其可识别多个抗原表位、可引起沉淀反应,制备时间短,成本低的原因广泛应用于研究和诊断方面。
三、免疫方法
可以采用以下各种方法之一进行免疫。
(1)淋巴结注射法:①在兔的两后足跖部皮下(或皮内)注射活卡介苗 50mg(每侧约0.30ml) 。7~10 天后,兔跖及腘肌淋巴结肿大;②于肿大的两侧淋巴结内各注射加有完全佐剂的IgG 乳化抗原 0.50ml(含 IgG 5mg/ml、青霉素 1 000U/ml、链霉素 1 000μg/ml);③必要时,14 天后,重复步骤②一次;④再过 7 天后,于两侧淋巴结内各注射加有完全佐剂的 IgG 乳化抗原0.50ml(含IgG5mg/ml、青霉素 1 000U/ml、链霉素 1 000μg/ml) ;⑤5~7天后,耳静脉采血。测定血清效价。
(2)皮下多点注射法:①家兔两侧掌(跖内各注射含有完全佐剂抗原 0.10ml(IgG 含量5mg/ml) ;②7~10 天后,脊柱两侧多点(颈、胸、腰椎各两点、共 6 点)皮下注射含不完全佐剂5的抗原,每点 0.50ml;③7~10 天后,脊柱两侧重复注射一次;④7~10 天后试血。不合格者重复步骤③。
(3)多途径联合注射法:①两侧掌(跖)内侧皮下注射含完全佐剂抗原 0.50ml(IgG 量为 5mg/ml) ;②14 天后,多点皮下注射含有不完全佐剂抗原;③7 天后,耳静脉注射不含佐剂的抗原 2ml;④测定血清抗体效价,不合格者重复步骤③,并适当递增 IgG 量。
暂无品牌问答