【求助】如何加量ug包装的同型对照的抗体 (附讨论，如何才能把流式做好！）

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2021-07-28

问题描述：

比如：CD45RA的percp-cy5.5，其浓度为20ul（0.06ug）/test，
其同型为;percp-cy5.5(25ug包装）浓度：0.2mg/ml,
那么如果CD45RA抗体如果加入20ul，那同型抗体应该加入多少ml:
我自己的初步计算是：1ul的3分之1.不知道我算对了吗？应该怎么加才好呢？

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alishang

用户

我认为不用那么严格吧。在此引申一下：做流式，最近我也在想，究竟怎样的操作才是标准的，什么时候一定用isotype？什么时候可以不用？再者如何才能把流式做好？染单个样品，很容易很漂亮。但当染批量的样品时，你控制批内变异到什么程度，怎样的标准操作才能将样品间误差减到最小？比如，我要染3组组合，每组4-7种不同荧光染料的抗体，我有2-3个实验组，每组3-4个动物，每个动物要染lung, Ln, Spleen。你调整所用细胞到同一数量来体外刺激和表面染色了吗？你怎么计数细胞？（这么多样品，你来的及吗？），每个抗体的原始浓度也是不同的，你严格控制了你的抗体稀释比例并保持一致了吗？（严格按照抗体说明书的用量？）你分析结果时，某一表型（的数量或百个分比）在同一实验组中的4个动物中的标准误或标准差有多大？如人医，个体差异大，你如何对你的流式数据做统计分析？你的结论对吗？怀疑过你的流式结果吗？你怀疑过哪些已发表的标准误小得可怜的流式结果吗？你有我这样的困惑吗，如果有，大家就来讨论吧！

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wuushark

用户

哈哈,看看RnD的IL-17抗体的流式结果,那叫一个勉强呀.

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俺来了

用户

就是，越做越觉得流式的影响因素很多，在本来就不是很明显的差异下，如何判断是流式技术的差异还是本身实验结果真正的差异？好像即使同样的标本，不同的荧光同样的分子染出来的比例就有差异，还有抗体滴定，每个抗体都做过吗？尤其是自己操作流式仪之后更加觉得流式结果也不一定是绝对的定量了？

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xiaotuz6316

用户

正因为流式的影响因素很多，对于一些可控的因素，更要严格遵守，比如抗体的用量，同型对照抗体的用量跟相应的一抗用量要一致（如一抗是1ug/test，同型对照也是加1ug/test，而不是按体积算），而且同型对照最好跟一抗来自同一个厂家。