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流式细胞检测同型对照的选择(供参考)
来自 : mayitao
由于抗体与细胞间存在非特异性结合(如电荷间互吸等),流式抗体与细胞结合时有特异性结合部分和非特异结合部分,流式同型对照试剂用于消除非特异结合所至非特异染色,严格来说,同型对照应该是同一抗原抗体制备的生产厂家,同一种属动物来源,同一种免疫球蛋白(包括亚型),同一荧光标记,作用类似调零(一般阳性率控制在1~2%内)。特别是多标调荧光补偿时,做为参考。荧光素直接标记一抗:FITC标记为例:兔抗人的CD34/FITC标记的抗体(荧光素直接标记一抗),抗体动物种属来源RabbitIgG抗体,它的同型对照应该是FITC标记的RabbitIgG(亲和纯化IgG)。注意同型对照的成份跟它的名称是相同的。使用标记一抗:RabbitAnti-CD34/FITC荧光素标记兔抗人CD34抗体IgG同型对照:RabbitIgG/FITC荧光素标记兔IgG间接免疫荧光检测:PE标记为例如果采用间接免疫荧光检测:一抗+荧光PE标记的二抗,抗体动物种属来源为小鼠抗人的CD4抗体+羊抗小鼠IgG/PE标记的二抗。它的同型对照应该是:亲和纯化小鼠IgG+羊抗小鼠IgG/PE标记的二抗。MouseAnti-HumanCD4MonoclonalAntibody小鼠抗人CD4抗体同型对照:MouseIgG+GoatAnti-mouseIgG/PE纯化小鼠IgG+羊抗小鼠IgG/PE标记的二抗
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