【求助】GAPDH做内参,请问有做出条带的条件(抗体浓度),多谢
2021-08-09
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gyzyxy
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我做这个,santa的抗体,中杉分装的,一抗1:1000,二抗1:5000(中杉进口分装)
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doctorliencheng
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我用碧云天的一抗,1:500稀释,发出来很好,就是回收的抗体不好用,好像也是某种进口抗体被他们分装的
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zl811121
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以GAPDH为内参的我做出来了,但目的蛋白的我没做出来。GAPDH为内参:一抗用的碧云天分装的抗体,浓度1:5000,二抗用的中杉的,浓度1:500.请问:我的组织放在-70度冰箱半年了,提的蛋白做WB,内参能做出来,是不是说明蛋白没问题?可是目的蛋白怎么一条带都没有了?希望高手给与指点。
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wuushark
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常遇到的情况是GADPH做的出来,目的条带出不来的.个人也遇到过这样的情况,而且也是你说的那个公司,做了三次,次次如此,后来找别人要了一个其他公司的GADPH,一次成功.你找别人要点其他内参抗体来试试吧.Santa的抗体也算不上什么好抗体了,质量并不稳定.
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yjh263
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我用GAPDH(康成的,1:1000做的,可回收用两三次),和ANTI-HA单抗(Roche,1:1000)混合一起做,效果还是很好的,没有互相干扰的现象发生。
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zl811121
用户
以GAPDH为内参的我做出来了,但目的蛋白的我没做出来。GAPDH为内参:一抗用的碧云天分装的抗体,浓度1:5000,二抗用的中杉的,浓度1:500.请问:我的组织放在-70度冰箱半年了,提的蛋白做WB,内参能做出来,是不是说明蛋白没问题?可是目的蛋白怎么一条带都没有了?希望高手给与指点。
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zifanqie_00
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santa的一抗,浓度为1:400,二抗我用的是1:2000
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