内参是内在参照,在各组织和细胞中表达相对恒定,在检测某些功能蛋白的表达水平变化时用它做参照物,可以校正蛋白定量、上样过程中存在的实验误差,保证实验结果的准确性。下面对这些抗体进行简要介绍:
Actin:即肌动蛋白,是细胞的一种重要骨架蛋白。Actin大致可分为六种,其中四种是不同肌肉组织特异性的,其余两种广泛分布于各种组织中,包括β-actin和γ-non-muscleactin。β-actin作为内参是得到了公认的,这是针对大多数组织和细胞来说的,它广泛分布于细胞浆内,表达量非常丰富,其含量占所有细胞总蛋白的50%。但是在一些少量特殊的情况下,如脂肪组织或细胞内,β-Actin的表达量就很少。β-actin由375个氨基酸组成,分子量大小为42-43kDa左右。
GAPDH:(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量146kDa,检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达,广泛用作Westernblot蛋白质标准化的内参。
Tubulin:即微管蛋白,是细胞的一种骨架蛋白。Tubulin分为α、β、γ、δ、ε等多种tubulin,其中α-Tubulin和β-Tubulin可以形成异源二聚体,是形成微管的最主要的两种Tubulin。α-tubulin和β-tubulin分子量分别为55kDa和50kDa,其实际检测条带均在55kDa左右。作为内参,β-tubulin的蛋白水平通常不会发生改变,因此被广泛用于WesternBlotting时上样量是否一致的参照,也常被用于免疫染色观察细胞的微管结构。
如何选择内参:
(1)考虑目的蛋白的大小,我们推荐内参要与检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上;
(2)不同的组织来源的样本在选择内参时还有一定的区别。比如某些细胞中,由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达增高,不适合做内参;
(3)内参抗体可检测的种属类型越多,在使用过程中的选择余地就越大;而小鼠源的单克隆抗体一般在特异性、稳定性以及效价都要优于多克隆抗体,联科品牌的内参抗体均为小鼠单抗;
(4)抗体的效价也是考察该抗体性价比的重要方面,也即相当于实际应用时的稀释比率.联科品牌的内参稀释比均达到1:1000-1:10000.。
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类别 | 厂商 | 目录号 | 名称 | 规格 | 目录价 |
Liankebio | 70-ab001-100 | AntiHis-TagMousemAb | 100ul | 1080.00 | |
Liankebio | 70-ab002-100 | AntiFlag-TagMousemAb | 100ul | 1080.00 | |
Liankebio | 70-ab003-100 | AntiHA-TagMousemAb | 100ul | 1080.00 | |
Liankebio | 70-ab004-100 | AntiGST-TagMousemAb | 100ul | 1080.00 | |
Liankebio | 70-ab005-100 | AntiMBP-TagMousemAb | 100ul | 1080.00 | |
Liankebio | 70-ab006-100 | AntiGFP-TagMousemAb | 100ul | 1080.00 | |
Liankebio | 70-ab007-100 | AntiT7-TagMousemAb | 100ul | 1080.00 | |
内参抗体 | Liankebio | 70-ab008-100 | β-ActinMousemAb | 100ul | 1088.00 |
Liankebio | 70-ab009-100 | β-TubulinMousemAb | 100ul | 1088.00 | |
Liankebio | 70-Mab5465 | Anti-GAPDHmAb | 100ul | 800.00 | |
Liankebio | 70-ab010-100 | β-Actin-HRPMousemAb | 100ul | 1288.00 | |
Liankebio | 70-ab011-100 | GAPDH-HRPMousemAb | 100ul | 1288.00 | |
Liankebio | 70-ab012-100 | β-Tubulin-HRPMousemAb | 100ul | 1288.00 |