正确进行抗体的保存对其功能和使用期限极为重要
有老师会遇到这样的问题:购买的抗体第一次进行实验结果很好,但是过一段时间再使用发现实验失败了。这时你要问一下自己:抗体保存你做对了么?
正确保存的抗体可在较长时间内不发生降解,有效性可延长至几个月甚至几年。相反,未正确保存的抗体可在几个小时内变性,导致实验失败。
在保存抗体时请注意以下几点:
为保持最大反应性,应按照厂家说明书保存试剂(如,当指定保存温度为2-8℃时,应避免将抗体置于室温下)。
保存抗体的经验法则是将其置于非无霜冰箱/制冷机内的严格密封容器中,远离组织固定剂和交联试剂。
除非加入稳定蛋白,如BSA(1%w/v),否则抗体不得在工作液中长期保存。避免长期保存稀释的抗体。
保存时还可能会遇到细菌或真菌污染。如果抗体保存在2-8℃超过2-3天,建议进行过滤除菌和/或加入抑菌剂/防腐剂,如0.05%叠氮化钠或0.1%硫柳汞。叠氮化钠可通过某些偶联方法干扰多种生物实验。因此,进行此类实验时最好使用离心透析过滤法、透析法或凝胶过滤法除去叠氮化钠,或使用无叠氮化物的抗体。
未稀释抗体应在保存于-20℃ 之前分装,以尽量减少可使抗体变性的反复冻融循环。集中保存抗体可预防或尽量减少降解。可在抗体溶液中加入终浓度为50%的冷冻保护剂,如甘油,以预防冻融造成的损失。请勿将含甘油的抗体保存于-80℃。
通常不对酶结合抗体进行冷冻,以免损失酶活性及其结合能力。最好将其保存于+4℃。
抗体上的荧光素较易感光淬灭。因此,荧光结合抗体应在深色瓶中避光保存。
长期保存时,某些抗体溶液可能产生不溶的成分。沉淀物可通过10000g快速离心去除。