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辣根过氧化物酶的活性测定方法
2021-07-23
问题描述:

详细点的,不要拷贝现有的分光光度法测定和循环连续流动分析法。谢谢大家了啊!

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蒲公英花开丶
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过氧化物酶(辣根过氧化酶,181U/mg)溶液(约0℃):取1.7mg过氧化物酶(Serva, Nr,31943)溶于5ml蒸馏水。  辣根,别名:马萝卜,拉丁学名:Armoracia rusticana.属罂粟目,十字花科、辣根属多年生直立草本。全体无毛。根肉质肥大,纺锤形,白色,下部分枝。茎粗壮,表面有纵沟,多分枝。原产欧洲东部和土耳其,已有2000多年的栽培历史。中国的青岛、上海郊区栽培较早,其他城郊或蔬菜加工基地有少量栽培。根有特殊辣味,含烯丙(基)硫氰酸(C3H5CNS),磨碎后干藏,备作煮牛肉及奶油食品的调料,或切片入罐头中调味。中国自古药用,有利尿、兴奋神经之功效。还具有较强的抗癌效果。
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chf20
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测酶活性的实验:.用萃取化学公司法(Amano法的改进型)测定葡萄糖氧化酶(1)试剂①磷酸盐缓冲液(pH7.0):取6.805g磷酸二氢钾(KH2PO4;Merck,Art.4873)溶于350mL蒸馏水中。用1M氢氧化钠溶液(NaOH(4g溶于100ml水))将pH值调至7.0,用蒸馏水定容至500mL。②邻-联二茴香胺(o-Dianisidine)溶液:取1.7mg邻-联二茴香胺(C14H16N2O2;Serva,Nr,19175)溶于25ml磷酸盐缓冲液。③过氧化物酶(辣根过氧化酶,181U/mg)溶液(约0℃):取1.7mg过氧化物酶(Serva,Nr,31943)溶于5ml蒸馏水。每毫升此溶液中应含有60个红紫倍精单位。④底物溶液(约0.55M):取5.0gβ-D-葡萄糖(C6H12O6;Sigma,No.G-5250)溶于蒸馏水中,定容至50mL。使用前,至少得将此酶静置3h。⑤酶(待测的葡萄糖氧化酶)溶液:用磷酸盐缓冲液溶解该酶。1mL配制的酶溶液中应含有大约0.1U。0.0037g溶于500μlPBS,再取10μl前者溶液定容至100PBS(约0.1U/ml)。测酶活性(118U/mg)的实验2(1)操作步骤:将0.50mLβ-D-葡萄糖溶液、0.10mL在冰水中冷却过的过氧化物酶(辣根过氧化酶)溶液和2.4mL邻-联二茴香胺溶液滴入一只小烧杯内混合,调温至25℃,然后将其全部加到1cm的比色皿内,最后加0.1ml酶于待测的葡萄糖氧化酶溶液,同时按动秒表。在连续15min内每隔1min于436nm处测一次吸光度(2)计算:用以下公式计算活性:式中:E436――每分钟吸光度的变化(436nm处)(15次的平均值)Ew――0.1ml所用酶液中含酶的重量(0.000074mg)8.3――1μmol邻-联二茴香胺/mL的吸光度(436nm处)3.1――反应混合物的总体积U1=53.25U/mg;U2=93.21U/mg;U3=13.30U/mg测酶活性(118U/mg)的实验5(061218)(1)操作步骤:将333μlβ-D-葡萄糖溶液、67μl在冰水中冷却过的过氧化物酶(辣根过氧化酶)溶液和1.6mL邻-联二茴香胺溶液滴入一只1cm的比色皿内,调温至25℃,最后加67μl酶于待测的葡萄糖氧化酶溶液,搅拌均匀(搅拌同时计时,共用8s,),然后重新按动秒表。在连续15min内每隔1min于436nm处测一次吸光度(2)计算:用以下公式计算活性:式中:E436――每分钟吸光度的变化(436nm处)(15次的平均值)Ew――67μl所用酶液中含酶的重量(0.00004958mg)8.3――1μmol邻-联二茴香胺/mL的吸光度(436nm处)2.067――反应混合物的总体积GOD:15min的平均值:U1=181.23U/mg;U2=167.36U/mg;U3=156.11U/mg4min的平均值:U1=156.56U/mg;U2=129.89U/mg,U3=134.97U/mg展开
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